通络救脑口服液对AD模型大鼠Bax和Bcl-2mRNA影响.docVIP

通络救脑口服液对AD模型大鼠Bax和Bcl-2mRNA影响 　　(1．齐齐哈尔医学院医药科学研究所，黑龙江齐齐哈尔161042；2．北京中医药大学基础医学院，北京100029) 　　摘要：目的：探讨大鼠大脑海马立体定向注射β－淀粉样蛋白1－40对Bax和Bcl－2mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其干预作用。方法：140只Sprague－Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对 照纽、阳性对照组、实验组(12、24、48mg?kg-1?d-1)共7组。采用大脑海马立体定向注射β－淀粉样蛋白1－40诱导Alzheimers病动物模型后，药物干预4周，第5周应用实时定量PCR法检测Bax和Bcl-2mRNA表达。结果：与假手术组比较。模型组Bax2-△△Ct明显升高，而Bcl-22-△△Ct明显降低，差异具有统计学意义(P＜0．05)，表明模型组Bax mRNA表达上调，而Bd-2 mRNA表达下调。与模型组比较，盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bax2-△△Ct显著降低。表明Bax mRNA表达下调；而盐酸多萘哌齐组??通络救脑口服液各剂量组Bcl-22-△△Ct显著升高，表明Bcl-2 mRNA表达上调。结论：大脑海马注射β－淀粉样蛋白1－40后大鼠海马组织Bax mRNA表达水平明显增高，Bcl－2表达明显降低，而通络救脑口服液可以抑制海马组织Bax mRNA的表达和促进Bcl－2 mRNA表达，从而发挥其抗老年性痴呆神经细胞凋亡的作用。 　　关键词：细胞凋亡；阿尔茨海默氏病；通络救脑口服液；实时荧光定量PCR 　　中图分类号：R-33　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05－0926-03 　　 　　阿尔兹海默病(Alzheimers disease，AD)是老年人常见的一种神经系统疾病，AD的病理表现主要为神经元丧失、神经元纤维缠结和老年斑。细胞凋亡不仅为机体维持正常生理所必需，而且与许多疾病的发生密切相关，它与老年性痴呆的关系越来越受到人们的重视。有研究表明AD早期就出现突触和神经元的大量丢失，中期AD病人内嗅区皮质中神经元丢失已达50％。这些研究已证明在疾病早期阶段，神经元已出现普遍的损伤，而且似乎在疾病全程中都存在，表明脑中神经元丢失的机制可能是凋亡。β－淀粉样蛋白可诱导培养神经细胞凋亡，但使神经元易于发生凋亡的细胞学和分子原理还不清楚，为此，笔者采用海马立体定向注射技术，观察β－AP对AD模型大鼠脑组织Bcl－2和Bax mRNA表达的影响及通络救脑口服液(TLJN Oral Solution)的干预作用。 　　 　　1材料 　　 　　1.1实验药物　通络救脑口服液，由北京中医药大学中药学院制备。盐酸多奈哌齐片由法国PFIZER PGM公司制造，产品批号5136903。Aβ1-4为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。Aβ1-4使用前用无菌生理盐水稀释成10μg?μL-1，37℃孵育1周，使其变为聚集状态的Aβ。 　　1.2实验动物　健康雄性清洁级SD大鼠140只购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号SCXK(京)2002-0003，鼠龄8―12周，体重(280±lO)g，经适应性饲养1周，完全随机分为7组：空白对照组、假手术对照组、阴性对照组、阳性对照组和3个剂量实验组，每组20只。 　　1.3试剂　SYBR　ExScriptTMRT-PCR kit(Perfect RealTime)为TAKARA公司产品，RNAiso Reagent为TAKARA公司产品，DEPC为瑞兴化学产品。 　　1.4仪器　ABl7300荧光定量PCR仪为美国ABI公司产品，2700型PCR System扩增仪为Applied Biosystems公司产品。 　　 　　2方法 　　 　　2.1动物模型的制作　实验大鼠1％戊巴比妥钠(40mg/kg)麻醉后，立体定位仪固定头部，备皮消毒，沿颅顶中线作2cm切口，分离骨膜使头骨暴露，于前囟向后3.0mm，中线左右各旁开2.2mm，用牙科钻打开颅骨，垂直进微量进样器针2.8mm，将1μL溶液缓慢注入，注射时间为5mm，留针5min，阴性对照组、阳性对照组、各剂量实验组左右侧海马各注射1μL Aβ1-40(10μg)溶液，假手术对照组注射1μL生理盐水。 　　2.2给药方法　造模后3天开始给药，根据人和动物按体表面积折算的等效剂量。阳性对照组按0.33mg?kg-1?d-1，每日1次灌胃，各实验组按分别12、24、48mg?kg-1?d-1给药，其余3组给等体积生理盐水，共4周。行为学测试结束后处死取材。 　　2.3荧光实时定量PCR检测大鼠大脑海马组织Bax和Bd-2 mRNA表达抽提总RNA按R