醒脑开窍针刺法干预实验性脑梗塞大鼠热休克蛋白基因表达研究.docVIP

醒脑开窍针刺法干预实验性脑梗塞大鼠热休克蛋白基因表达研究 　　[摘　要]　目的:揭示醒脑开窍针刺法治疗脑梗塞的分子机制。方法:采用分子杂交的技术,观察了实验性脑梗塞大鼠缺血区脑组织HSP70mRNA的转录水平,并观察了醒脑开窍针刺法对缺血区脑组织HSP70mRNA表达的干预作用。结果: 发现醒脑开窍针刺法可增加梗塞区皮质、纹状体、海马HSP70基因的表达。证实了醒脑开窍针刺法对缺血后的脑细胞的保护作用优于常规针刺法,揭示了该法保护脑细胞的部分分子机制。 　　[主题词]　脑梗塞/针灸疗法;醒脑开窍;热休克蛋白质类/代谢 　　Study on HSP70mRNA Expression Intervened by ?Xingnao Kaiqiao? Needling M ethod in Rats of Experimental Cerebral InfarctionMa Yanfan,Wang Shu,Lu Bin,et al(The First Affiliated Hospital of Tianjin College of TCM,300193)[Abstract]　Purpose　To explore molecular mechanism of ?Xingnao Kaiqiao? nee dling method for treatment of cerebral infarction.Methods　Molecular hybridization techniques were used to observe the transcription level of HSP70mRNA in the cortex,striatum and hippocampus in rats of middle cerebral artery obstruction,and the effect of ?Xingnao Kai qiao? needling method on HSP70mRNA expression.Results　?Xingnao Kaiqiao? needing method increased HSP70mRNA expression.Conclusion　?Xing nai Ka i qiao? needling method has a better prote ctive action than that of routine needling method on brain cells after ischemia.[Key words]　Cerebral Infarction/acup ther;Consciousness Restor Resuscitat;Heat?Shock Protein/metab 　　热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类在进化上高度保守,广泛存在于原核生物及真核生物细胞内,因高温病原体或理化等有害因素的刺激应激产生的蛋白质,它能保护机体或细胞不受或少受伤害[1]。热休克蛋白家族(HSPs)分子量为70 KD的蛋白(HSP70)的表达,侧重反映脑 细胞损伤时伴有的耐受和防御性变化,HSP70mRNA表达的改变既可作为脑缺血模型成功的指标,也可用来作为比较多种保护性措施效应的指标。我们以前的研究发现醒脑开窍针刺法用于脑梗塞的治疗疗效显著,优于常规针刺法。为了揭示该法治疗脑梗塞的分子机制,我们采用分子杂交的技术开展了该法干预实验性脑梗塞大鼠缺血区脑组织HSP70基因表达的研究。 　　1　材料与方法 　　1.1　试剂 　　总RNA提取试剂盒,随机引物??剂盒购自Promega公司;α???32?P?dCTP购自北京亚辉生物医学工程公司。大鼠HSP70引物设计为:Lower primer:?5′ ttggtcgggccccacgactag3′?;Upper pr imer:?5′tagagtccag?ccaggagatga3′?。β?actin引物 设计为:Lower primer:5′ccat ctct tgct cgaa gtct ag 3′;Upper primer:5′gtat gcct ctgg tcgt acca c 3′。引物由中国科学院北京微生物研究所合成。 　　1.2　动物分组及模型 　　170只健康Wistar大鼠,雌雄各半,体重250 g左右,随机分为5组,即空白对照组、假手术组、模型组、醒脑组、常规组。其中除空白对照组、假手术组各10只外,其余每组50只。模型组、醒脑组、常规组平均分为缺血1 h、3 h、6 h、24 h、48 h 5个时段,每时段10只。大脑中动脉(middle cerebral artery,M