重组人血管内皮抑制素冻干粉针剂研制和质量评价.docVIP

重组人血管内皮抑制素冻干粉针剂研制和质量评价 　　【摘要】 目的 研究重组人血管内皮抑制素(endostar)冻干粉针剂的制备和质量控制。方法 以4 %甘露醇、2 %蔗糖、30 mm乙酸钠为辅料，将endostar制备成冻干粉针剂。分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS)和高效液相法(HPLC)分析冻干粉的纯度，使用人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)分析冻干粉的活性，其他检测项目按照《中国药典》进行。结果 Endostar冻干粉的纯度大于99%，生物学活性每支含量2.4×10??5?U，等电点主区带在8.8~9.8之间，冻干粉用胰蛋白酶消化后，肽图与理化对照品一致。结论 按照此工艺制备的endostar冻干粉针剂各项指标均符合《中国药典》要求。? 　　【关键词】 　　血管内皮抑制素；冻干粉；纯度；生物学活性；肽图 　　 　　Production and Quality Research of Recombinant Human Endostatin Freeze-dried Powder 　　 　　LIU Wu, YAO Xue-jing, LI Zhuang-lin. Shandong Simcere-Medgenn Bio-Pharmaceutical Co., Ltd, Yantai 264006, China 　　? 　　【Abstract】 Objective 　　To prepare recombinant human endostatin (endostar) freeze-dried powder and research its quality.Methods Endostar freeze-dried powder was prepared with 4 % mannitol, 2 % sucrose, 30 mM sodium acetate. The product purity was analysed by SDSand HPLC, and biological activity was measured with HUVEC. Other test methods were performed according to chinese pharmacopoeia.Results The purity of endostar freeze-dried powder was more than 99%. The biological activity was 2.4±10??5?U per piece and isoelectric point was between 8.8~9.8.The peptide mapping of endostar freeze-dried powder was consistent with reference substance.Conclusion Endostar freeze-dried powder prepared in accordance with the process were in line with chinese pharmacopoeia standards.? 　　【Key words】 　　Endostatin; Freeze-dried powder; Purity;Biological activity;Peptide mapping 　　? 　　 　　? 　　作者单位:264006烟台,山东先声麦得津生物制药有限公司 　　 　　 　　 　　血管内皮抑制素是1997年O?Reilly等从小鼠血管内皮瘤的细胞培养液中分离获得的天然蛋白分子，它是内皮细胞增殖、迁移和新生血管生成的专一性抑制剂[1]，后来经证实是胶原X VIII NC1结构域C末端的多肽片段[2]。重组人血管内皮抑制素注射液于2005年9月在我国上市，主要用于非???细胞肺癌等恶性肿瘤的治疗，并且具有无毒副作用、不容易产生耐药性等优点[3, 4]。但由于重组人血管内皮抑制素水针剂需要低温储藏和冷链运输，因此其冻干粉针剂的研制和质量控制具有重要意义。? 　　1 仪器与材料? 　　1.1 设备、仪器和细胞 　　西林瓶灌装机(长沙楚天)；LYO-13冻干机(上海东富龙公司)；电泳仪(Bio-Rad公司)；CO??2?培养箱(Sanyo公司)；酶标仪(Thermo Scientific公司)；HP 1100型高效液相色谱仪(Agilent公司)；C??18?反相柱，粒度5 μm，孔径300 ?，4.6 mm×25 cm(Vydac公司)；HUVEC细胞株(本室保存)。? 　　1.2 药品和试剂 　　Endostar原药(批号YY20