光谱法研究白藜芦醇与白藜芦醇苷的异构化及其与蛋白质的感化.pdfVIP

摘 要 荧光光谱法是研究分子构象的一种常用而有效的方法，能提供反 映分子的成键和结构情况的多个物理参数。紫外吸收光谱法是一种直 接检测物质结构变化的工具。衰减全反射红外光谱法(ATR)具有非 破坏性和非侵入性，能在分子水平上现场检测溶液中化学或生物反应 过程，获得反应过程中物种变化的信息。 本论文运用荧光光谱法、紫外吸收光谱法和现场衰减全反射红外 光谱法(ATR)研究了白藜芦醇以及白藜芦醇苷与生物大分子的相互 作用，白藜芦醇与白藜芦醇苷的生物利用率以及光致异构化和异构化 机理。主要工作如下： 1．综述了荧光光谱法、紫外吸收光谱法和衰减全反射红外光谱法的 原理和近期的研究进展。 2．用荧光光谱、傅立叶变换衰减全反射红外光谱(ATR．FTIR)和 紫外一可见吸收光谱法研究了转铁蛋白在生理pH值(pH=7．O)下 和白藜芦醇的相互作用。并研究了脂肪酸对转铁蛋白与白藜芦醇作 用的影响。考察了在存在和不存在转铁蛋白的情况下白藜芦醇苷的 溶解性、光热稳定性。实验表明，转铁蛋白与白藜芦醇分别对白藜 芦醇与转铁蛋白内源荧光的猝灭机理是静态猝灭。白藜芦醇与转铁 蛋白相互作用形成了1：1的复合物，其结合常数可以用不同的方法 得到。氢键和范德华力在转铁蛋白与白藜芦醇的相互作用中起了重 要作用。根据F6rster能量转移理论，求得了转铁蛋白与白藜芦醇 的结合距离(r=3．39nm)。同步荧光光谱和红外光谱表明白藜芦醇 与转铁蛋白的作用使得转铁蛋白的构像和二级结构发生改变。脂肪 酸对白藜芦醇与转铁蛋白的作用既有竞争又有协调作用。与转铁蛋 白作用后，白藜芦醇的光、热稳定性稍有增强，而溶解性有显著的 提高。 3．在模拟生理条件下，用稳态荧光光谱法研究了白藜芦醇苷与牛血 清白蛋白(BSA)以及溶菌酶的相互作用。实验表明，白藜芦醇苷 在较高的浓度时发生自身缔合。白藜芦醇苷能显著猝灭BSA和溶 菌酶的内源荧光，静态猝灭和非辐射能量转移是导致白藜芦醇苷对 04、3．86×104，结合位点数n都接近1。偏振 数心分别为5．90×1 荧光实验表明白藜芦醇苷是与BSA中的Trp．214结合，而同步荧 光光谱表明白藜芦醇苷在溶菌酶中与酪氨酸结合。疏水力、氢键分 别是白藜芦醇苷与BSA、溶菌酶之间的主要结合力。依据FOrster 非辐射能量转移理论，得出相对BSA，白藜芦醇苷与溶菌酶的结 合距离增大。所以，酚类化合物一蛋白之间的作用与蛋白质的结构 具有相关性。 4．用现场ATR．FTIR技术研究了反式白藜芦醇苷的现场光致异构化。 紫外．可见吸收光谱结果表明，反式白藜芦醇苷异构化与紫外照射 波长、照射时间以及溶液的pH值有关，而反式白藜芦醇苷的浓度 对反式白藜芦醇苷异构化速率影响不大。现场ATR．FTIR结果表明 II 反式白藜芦醇苷异构化主要导致了C=C、烯氢、亚甲基以及苯环 上的取代基的振动发生改变。此外，发现与BSA作用后，反式白 藜芦醇苷异构化过程的速率常数减小，反式白藜芦醇苷光稳定性提 高。而且BSA对反式白藜芦醇苷的保护作用与BSA的浓度，溶 液的离子强度有关。 关键词：白藜芦醇、白藜芦醇苷、转铁蛋白、牛血清白蛋白、溶菌酶、 异构化、荧光光谱法、现场衰减全反射红外光谱法(ATR)、紫外．可 见吸收光谱法。 III ABSTRACT Fluorescence isaneffectivemethodto molecular spectroscopy study a numberof aboutmolecular conformation，and providelarge parameters andstructurenatureoftheconcerned bonding