核酸探针电化学传感技巧用于酶活性和腺苷检测的研究.pdfVIP

摘 要 电化学生物传感器，具有易于实现微型化、集成化、操作简单等优点，在化 学、生物学基础研究、临床检验、环境监测等方面发挥着越来越重要的作用。核 酸探针能够与多种目标物特异性结合，形成多种灵活的分子识别和信号转换机制。 本论文基于核酸探针的特点，针对酶和生物小分子的检测，发展简便、快速、灵 敏的电化学传感器，具体完成了以下研究工作： 1．二茂铁核酸探针的合成及电化学表征 对琥珀酰亚胺偶联方法进行改进，尽量消除水对反应体系中活性中间体的影 响，并采用高效液相色谱(HPLC)纯化，得到了二茂铁标记的核酸探针。电化 学测量证明二茂铁已成功标记到3’为NH2的核酸探针上。相比于一般的采用透析 分离纯化二茂铁核酸探针的方法，HPLC分离纯化的二茂铁核酸探针具有纯度高、 信号强等优点。为下一步的工作打下了基础。 2．二茂铁核酸探针用于APEl酶活性的电化学检测 APEl酶是一种重要的DNA损伤修复蛋白，经典的放射性标记活性分析虽然 灵敏度高，但存在操作复杂、费时、有放射性污染等缺陷。我们在带有AP位点 的核酸探针上修饰二茂铁，并与固定在金电极表面的捕获探针杂交，形成带AP 位点的二茂铁修饰的双链DNA。利用APEl酶对AP位点切割产生的信号变化实 U／ml，检 现了酶活性的电化学检测。该方法对APEl酶活性的检测范围是0．02—2 测下限为O．02U／mI，具有操作简单、灵敏度高等优点，有望用于生物样品中DNA 损伤修复的研究。 3．“裂开型”核酸适体结合金纳米颗粒信号放大用于腺苷的高灵敏检测 虽然核酸适体能够实现小分子的特异性识别，但由于结合常数一般相对较低， 往往需要结合信号放大技术以提高检测灵敏度。我们构建了～种基于核酸适体和 金纳米颗粒信号放大的检测小分子腺苷的电化学生物传感器。该传感器对腺苷检 测的线性范围为O．1 nM，检测下限为0．1 pM．1 pM，且特异性好，有望拓展到其 他小分子的检测中。 关键词：电化学生物传感；二茂铁核酸探针；酶活性；小分子；金纳米颗粒； 1I 核酸探针电化学传感技术用于酶活性和腺苷检测的研究 Abstract Electrochemicalbiosensorshave rolesinchemicaland playedimportant basic clinical sisandenVironmentalfbrtheir research， diagno analyses biological of and ofnexible accessibilityminimization，integrationoperation．AVariety signal basedonthe ofnucleic transformationcanbeconceiVed binding strategies speciflc acid acid totheir the the ofnucleic thesis，bytakingadVantages probes targets．In