生物金属化增强电化学免疫传感器旌旗灯号的研究.pdfVIP

摘 要 对蛋白质的检测在生命科学领域具有重要的意义。目前，已经有 一些重要的对蛋白质的检测方法，比如放射免疫分析，酶联免疫分析 等。但是，随着生命科学的发展，这些方法的缺点已经越来越明显，这 使得这些方法的应用受到了一定的l；ff：带rJ，尤其是在一些高灵度检测的 领域比如对疾病的早期诊断方面。所以，很有必要建立一些具有高灵 敏度、易操作和有通用性的蛋白质检测方法。显然，对免疫传感器的 信号进行增强会大大改善它的灵敏度。电化学装置因为具有简单、灵 敏和易于微型化的优点，正越来越受到人们的关注。毫无疑问，对电 化学免疫传感器进行信号增强技术研究会加快免疫分析的进步。本研 究在增强免疫电化学传感的信号方面做了以下三个方面的工作： 第一部分：提出了一种基于适配体识别和生物催化金属沉积的电 化学免疫传感对血小板源生长因子BB(PDGF-BB)进行高灵敏检测。在 本方法中，首先把固定抗体固定到电极的表面，接着，依次把抗原和 生物素标记的适配体溶液滴加到电极表面进行反应以形成免疫复合 物。然后，通过生物素和亲合素的特异性反应，把亲合素标记的碱性 磷酸酶固定到电极表面。碱性磷酸酶可以催化抗坏血酸磷酸酯镁 (AA—P)水解成抗坏血酸，后者把溶液中的银离子还原成金属单质沉 积到电极的表面。最后用线性扫描伏安法对电极表面沉积的金属银进 行测量。基于生物金属化的高灵敏度，本方法在对PDGF-BB的检测中， 第二部分：提出了一种基于功能化的硅纳米粒子的免疫传感器对 前列腺特异性抗原(PSA)进行检测。在这种方法中，第一次提出了同 时修饰上了检测抗体和碱性磷酸酶两种物质的硅纳米粒子用于对PSA 电化学免疫检测。 当固定抗体通过一层自组装单分子膜被连接到电 极的表面上以后，接着通过一个免疫夹心反应把碱性磷酸酶固定到 电极的表面。 当ALP酶催化从一P水解生成抗坏血酸以后，银离子在 电极的表面被还原。最后，在电极表面沉积的金属银的量与被固定到 电极表面的抗原的量成一定的比例关系。因为本方法中用SiNPs来 作为酶的载体，可以极大的提高检测的灵敏度，电化学峰电流和抗原 浓度在l到35ng／mL范围内保持良好线性关系，检测下限为 0．76ng／mL。 ：- 第三部分：提出了一种基于脂质体包埋碱性磷酸酶和生物催化金 属沉积的超灵敏免疫传感器。为了对这种提出来的免疫分析方法的可 行性进行检测，采用免疫夹心反应的原理对PSA这目标检测物进行了 检测。 当固定抗体、抗原和检测抗体修饰的脂质体在电极的表面形 成免疫夹心复合物以后，向电极的表面滴加表面活性剂，使脂质体破 裂释放出所包含的碱性磷酸酶，接着利用碱性磷酸酶的催化特性引 发电极表面的银沉积反应，以在电极表面形成一层银纳米粒子。 脂 质体用做酶的载体结合酶的高催化活性成功的提高了免疫分析方法 的范围内都保持了较好的线性，最低检测下限可以达到0．007ng／mL。 关键词：电化学免疫分析法：适配体：血小板源生长因子BB： ’ 硅纳米粒子：银沉积：脂质体：前列腺特异性抗原： 生物催化沉积 n ABSTRACT for a roleinlife The thedetectionof immunoassay veryimportant proteinplays sciences．At methodssuchas Blot RIA，ELISA，Western present，detection play in the ofthelife roles