Tan第三章 基因工程的载体PPT.ppt

本课程内容;第三章 基因工程的载体;3.1 载体的功能及其特征;作为工程载体必备的条件;;克隆载体(cloning vector) ;表达载体(expression vector);穿梭载体(shuttle vector) ;病毒载体(virus vector);载体从构建来源分;3.2 质粒克隆载体;质粒（plasmid）;;3.2.1 质粒的生物学特性;;;3.2.1.1 质粒DNA的复制;松弛型和严谨型质粒;3.2.1.2 质粒DNA的不亲和性或互不相容性（incompatibility）;质粒不亲和性的机制;3.2.1.3 质粒的转移和迁移;迁移作用(mobilization);3.2.1.4 质粒的重组性;3.2.1.5 显性质粒和隐性质粒;根据质粒基因编码的特性将质粒分为五大类;;3.2.2 质粒载体的构建;引序;;3.2.2.1 理想的质粒载体应具备的条件;3.2.2.2 构建质粒载体应遵循的原则;3.2.2.3 常见质粒载体及其构建;;;实验室常用质粒：;pBR322质粒载体的优缺点;;;2. pBR327：一个多拷贝质粒;pBR327：一个多拷贝质粒;3. pUC8－Lac 选择质粒;;4. pGEM3Z-DNA的体外转录;;实验一 质粒的制备;3.2.2.4 质粒载体的评价;3.3 病毒（噬菌体）克隆载体;噬菌体 (phage);3.3.1 噬菌体的生物学特性;噬菌体溶菌生长;噬菌体溶原生长;3.3.2 ?噬菌体载体;3.3.2.1 ?噬菌体的性质;λ噬菌体的侵染循环;3.3.2.2 ?噬菌体载体构建的原理;λ－DNA的结构 ;;策略：;Ⅰ. 缩短长度:入噬菌体载体的 类型 ? 插入型载体(insertion vector);插入型载体;Ⅰ. 缩短长度:入噬菌体载体的 类型 ? 替换型载体(replacement vector) ;;取代型载体;Ⅱ.修饰酶切识别位点;通过自然选择法筛选无EcoR I识别位点;λ-DNA的抽提;3.3.2.3 重组?DNA分子的体外包装;3.3.2.4 ?噬菌体载体的评价;3.3.3 柯斯质粒载体或称粘粒(cosmid);;Cos质粒pJB8;（二）Cosmid载体的特点;3.3.4 M13单链丝状噬菌体载体;M13噬菌体的侵染循环 ;（二） M13-DNA载体家族;;外源基因由M13mp8向M13mp9载体的转;2. 噬菌粒（Phagemid）;pEMBL8的结构;将pEMBL8转化为单链形式 ;（三） M13-DNA作为载体的优点及用途;3.4 酵母载体;(一) 2um质粒的选择标记;leu-作为酵母载体的选择标记基因;(二) 以2um质粒为基础的载体—酵母附加质粒;YEp的结构;（三） YEp可以插入酵母的染色体DNA;YEp整合到酵母染色体上;(四) 其他类型的克隆载体;;整合型载体 ;在一个特定的克隆实验中选用哪一种类型的质粒需要考虑三个因素;;复制型酵母载体;3.5 人工染色体克隆载体;;;;YAC载体的结构和应用;;;利用YAC载体克隆外源基因;YAC载体的使用;;;细菌人工染色体(BAC);;;;;;PAC;;双元细菌人工染色体( BIBAC);可转化人工染色体( TAC);;;;构建文库需要的克隆的数目;;;复习思考题