生物化学 第7章 蛋白质理化性质及其分离纯化.pptVIP

第7章 蛋白质的理化性质及其分离纯化 一、蛋白质的两性解离与等电点 等电点（pI）：在某一pH值溶液中，蛋白质酸性基团和碱性基团的解离程度相当，蛋白质分子所带正负电荷相等，净电荷为零，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI)。 溶液pH＝pI时，蛋白质所带正、负电荷相等； 溶液pH＞pI时，蛋白质带净负电荷； 溶液pH＜pI时，蛋白质带净正电荷。 蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值。 蛋白质等电点的大小与其氨基酸组成有关。 对于变性的蛋白质，可由其酸性氨基酸与碱性氨基酸的比例来判断。 对于天然蛋白质，由于其R基团不能完全暴露在外，故不易判断。 蛋白质的等电点不是一个恒定值，它受溶液的离子种类和离子强度的影响。 蛋白质在纯水中的带电状态不受其它离子的干扰，完全由H+的解离和结合来决定，这种条件下的等电点称为蛋白质的等离子点。 蛋白质的等离子点是特性常数。 电泳（electrophosesis) 二、蛋白质的胶体性质 真溶液的溶质分子的颗粒大小1nm； 胶体溶液中溶质分子的颗粒大小在1-100nm； 蛋白质分子的相对分子量在1-100万，其颗粒大小(2-20nm)属于胶体粒子的范围。 另外，蛋白质分子表面有许多极性基团，亲水性极强，容易与水形成稳定的亲水胶体溶液。 蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜 蛋白质形成稳定的亲水胶体的原因： 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 蛋白质胶体溶液具有一般胶体溶液的性质∶丁达尔现象、布朗运动、半透膜不透性、吸附性、胶凝性、粘性。 蛋白质的膜分离技术 P302 利用蛋白质的半透膜不透性，将蛋白质中所含非蛋白小分子除去 膜分离技术可分为∶透析 超滤 三、蛋白质的变性 P233 1、变性：在某些物理或化学因素的作用下，蛋白质严格的空间结构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起蛋白质若干理化性质和生物学性质的改变，称为蛋白质的变性(denaturation)。 2、引起蛋白质变性的因素有： ① 物理因素：高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波等； 例如：皮肤粗糙、白内障、杀菌 ② 化学因素：强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐、表面活性剂等。 例如：重金属——与-SH生成不溶性的硫化物 浓乙醇、去污剂——破坏疏水作用力 4、蛋白质变性的可逆性∶ 可逆变性：是指使蛋白质变性的条件解除后，能恢复其原有性质。 不可逆变性：是指使蛋白质变性的条件解除后，仍不能恢复其原有性质。 /biochemistry/gif/5.jpg /biochemistry/gif/1.jpg 使蛋白质沉淀的方法 等电点沉淀 盐析 有机溶剂沉淀 重金属盐沉淀 生物碱试剂沉淀 热变性沉淀 1、等电点沉淀 2. 盐析 在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析（salt precipitation，salting out）。 原因：盐分子与蛋白质争夺水化膜，并使蛋白质分子的电离抑制，表面电荷减少 常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。 盐析时，溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好。 盐析沉淀蛋白质时，通常不会引起蛋白质的变性。 分段盐析： 半饱和硫酸铵溶液可沉淀分子量较大的蛋白，而饱和硫酸铵溶液可沉淀分子量较小的蛋白。 因此，使用不同浓度的硫酸铵溶液就可将分子量不同的蛋白质进行初步分离。 盐溶∶在盐浓度很低时，蛋白质的溶解度随着盐浓度的增加而增加，这种现象称为蛋白质的盐溶。 b.盐溶—盐析 等电点沉淀的蛋白质溶液中加入NaCl后沉淀溶解—盐溶 盐析 向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出 3. 有机溶剂沉淀 凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白质。 沉淀原理是：① 脱水作用；② 使水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。 缺点：常会使蛋白质变性 操作注意事项: 必须在低温下尽量缩短处理的时间 及时将蛋白质中残存的有机溶剂除去 /show/161/11901.htm 习 题 1、为获得不变性的蛋白质，常用的方法是（ ） A、用三氯醋酸沉淀 B、用苦味酸沉淀 C、用重金属盐沉淀 D、低温盐析 E、常温醇沉淀 2、对于蛋白质的溶解度，下列叙述中哪一条是错误的？ A、可因加入中性盐而增高 B、在等电点时最大 C、可因加入中性盐降低 D、可因向水溶液中加入酒精而降低 E