第1章 基因工程的基本概念 yuPPT.ppt

云南大学2015春季必修课程;生命科学与生物技术的理论体系;生命科学理论与技术; 细胞生物学基础;分子生物学基础;生物大分子的结构与功能;基因工程;D 基因工程的基本形式;A 重组DNA技术的基本定义;B 基因工程的基本定义;C 重组DNA技术与基因工程的基本用途;大规模生产生物活性物质;有多个术语表述基因工程： 基因工程（gene engineering）; 遗传工程（genetic engineering）; 基因操作（gene manipulation）; 重组DNA技术（recombinant DNA technique）; 基因克隆（gene clone）; 分子克隆（molecular clone）等等。 现在人们的基因工程，主要是强调通过基因操作，改变生物的性状，获得人类需要的某些产品或生物性状。;D 基因工程的基本形式;;蛋白质工程的概念;蛋白质工程主要内容;细胞（组织）工程概念;组织工程——人造器官; 干细胞：1999年4月， 美国的科研人员首次成功地从成年人骨髓的干细胞在体外培养分化出软骨、脂肪和骨骼细胞。标志着干细胞的研究取得了重大进展。 以这项技术为代表的组织工程的突破具有广阔的应用前景，在不远的将来为实现人造“器官”成为可能。;酶工程的概念; 酶工程的主要内容;发酵工程;1、基因工程理论基础—三大理论发现 （1）20世纪40年代：证明了遗传物质是DNA 1865年 G.J.Mendel的豌豆杂交试验 20世纪20-30年代 确认自然界有DNA和RNA两类核酸，并阐明了核苷酸的组成 1944年O.T.Avery 肺炎球菌转化实验 1952年A.D.Hershey和M.Cha-se 用DNA35S和32P分别标记T2噬菌体的蛋白质和核酸，感染大肠杆菌; 肺炎双球菌转化实验;（2） 1953年Watson和Crick ：DNA双螺旋结构 （3） 1958～1971年：先后确立中心法则,破译64种密码子，揭示了遗传信息的流向和表达确定了遗传信息的传递方式 ; B 技术上的3大发明： 1．“基因剪刀”－限制性内切酶的发明 （1）20世纪40－60年代，科学家们就为基因工程设计了美好的蓝图，但是面对庞大的dsDNA（104，2.2*1011公里）束手无策，无从下手把它切成单个基因片断。 （2）当时的酶学知识已有相当的发展，但是没有一个已发现的酶能完成这样的使命。 （3）1970年，Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌（Haemophilus inffuenzae）分离纯化了HindⅡ，取得了突破，打破了基因工程的禁锢，迎来了改造生物的春天，为基因工程奠定了最为重要的技术基础。;Restriction enzyme;Ligase; 2．载体(“交通工具车子”)－基因工程技术诞生的第二个技术准备 （1）?有了切割与缝合（ligase）基因DNA的工具，还得有一个载体 将重组DNA送到宿主细胞中去。 （2）1946年起，Lederberg就研究细菌性因子（F因子）.50-60年代相继发现了R因子（抗药因子），CoE(大肠杆菌因子)等质粒。 （3）1972年 Berg 首次实现基因重组(将SV40病毒DNA与噬菌体P22DNA在体外重组成功)----第一个重组DNA分子，1980年诺贝尔化学奖 1973年Cohen才能将质粒作为基因工程载体使用（至今一直是基因工程最重要最广泛使用的载体）。这是基因工程的第二个技术准备。;vector;Importance of E. coli;; 3．逆转录酶－1970年Baltimove和Temin等同时各自发现了逆转录酶，打破了遗传学（生物学）中心法则，使真核基因的制备成为可能。（？？？） (1)真核基因组庞大而复杂，不易制得基因图谱。HGP2005年完成，2.8万个基因，1－3kb/基因，104，2.2*1011公里。 （2）即使有了基因图谱，因为真核基因有内含子，不能在原核表达系统剪接出mRNA，没有成熟的mRNA就不能得到相应得产物。 （3）经过逆转录mRNA→cDNA (complementory DNA)文库要比基因组文库小得多，所以筛选阳性克隆就方便得多。 ;1973年，Cohen等获得了抗四环素和新霉素的重组菌落TcrNer ----标志着基因工程的诞生。;E 基因工程的发展;（三） 基因工程的腾飞; 基因工程药物的