HPLC法测定气血双补口服液中芍药苷含量.docVIP

HPLC法测定气血双补口服液中芍药苷含量 　　[摘要] 目的 建立气血双补口服液中芍药苷含量的测定方法，为提高该制剂的质量标准提供研究依据。 方法 采用高效液相色谱法，流动相：甲醇-0.1%磷酸（29∶71）；色谱柱：汉邦ODS-C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；体积流量：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。 结果 芍药苷在10.00～80.00 μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率为99.45 %，相对标准偏差（RSD）为0.63%。 结论 该方法简便、可靠、重现性好，可用于气血双补口服液的质量控制。 　　[关键词] 气血双补口服液；芍药苷；高效液相色谱法 　　[中图分类号] R282.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）05（b）-0127-02 　　气血双补口服液为南京军区南京总医院制剂科生产的中药复方制剂，处方是由白芍、黄芪、当归、仙茅、熟地黄等10味中药精制而成，具有益气养血、温肾填精的功效，主要用于治疗气血两虚证，症见头晕目眩、少气懒言、倦怠、乏力、面色萎黄、心悸失眠、手足发麻等。该产品临床使用十余年，疗效确切。气血双补口服液现行质量标准为采用薄层色谱法对黄芪、熟地黄和枸杞子进行定性鉴别，而对于方中臣药白芍却没有制订相应的检测项目。鉴于目前高效液相色谱法在含有白芍的中成药检测中的广泛应用[1-6]，本实验建立的适用于气血双补口服液中芍药苷的高效液相色谱测定方法，为有效控制该产品质量，制订该制剂新的质量标准提供参考依据。 　　1 仪器与试药 　　UV 1700紫外-可见分光光度计；Waters高效液相色谱仪（Waters 1525泵，2487紫外检测器）；KQ 2200DB型数控超声波清洗器；梅特勒尔AE 240电子天平。甲醇：色谱纯（美国天地）；水：自制纯化水；其他试剂均为分析纯。 　　白芍、枸杞子、熟地黄、当归、仙茅、淫羊藿、黄芪、茯苓等药材均来自南京医药有限公司，经任海祥副主任药师鉴定为正品；气血双补口服液（10 mL/支）为南京军区南京总医院制剂科生产，批号为101021、101123、110218、110314、110407。 　　芍药苷对照品（批号：110736 - 200934）购自中国药品生物制品检定所。 　　2 方法与结果 　　2.1 方法 　　2.1.1 色谱条件 　　汉邦ODS-C18色谱柱（5 μm，250 mm × 4.6 mm）；流动相：0.1%磷酸水溶液-甲醇（71∶29）；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。在上述条件下，芍药苷与其他组分能达到基线分离。 　　2.1.2 溶液的制备 　　2.1.2.1 对照品溶液的制备 将芍药苷对照品减压干燥后精密称取4.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加入甲醇约30 mL，超声溶解15 min，冷却至室温，甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。取对照品储备液稀释，可得80.00、60.00、40.00、20.00、10.00 μg/mL等一系列浓度的对照品溶液。 　　2.1.2.2 供试品溶液的制备 精密量取气血双补口服液样品10 mL，首先用乙醚萃取3次，每次10 mL。合并萃取后的水层，加入正丁醇再萃取3次，每次20 mL。合并正丁醇液于蒸发皿内，置水浴锅上挥干。残留物用稀乙醇溶解，置于50 mL容量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀后用0.45 μm的微孔滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。 　　2.1.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺少白芍的气血双补口服液处方药材，按照配制工艺配制气血双补口服液，然后按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。 　　2.1.3 方法的专属性考察 　　按照上述色谱条件对对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液进行分析，结果无干扰。见图1。 　　2.1.4 线性关系考察 　　将上述制备的对照品溶液各进样2次，测平均峰面积积分值。以峰面积积分值（μV·s）为纵坐标，对照品浓度（μg/mL）为横坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程为：Y = 14 821X-51 902，r = 0.999 4。结果表明，芍药苷对照品浓度在10.00～80.00 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。 　　2.1.5 精密度试验 　　精密吸取10 μL浓度为60.00 μg/mL的对照品溶液，重复进样6次，芍药苷峰面积平均值为857 282，RSD为0.55%，表明本方法精密度良好。 　　2.1.6 稳定性试验 　　取同批气血双补口服液（10 mL/支，批号：110407），按照供试品溶液的制备方法处理后，分别于0、1、2、4、6、8 h，进样10 μL测定，计算样品中芍药苷含量为0.351 mg/