HPLC法测定珍杞降糖胶囊中绿原酸含量.docVIP

HPLC法测定珍杞降糖胶囊中绿原酸含量 　　[摘要]　目的　建立珍杞降糖胶囊中绿原酸的HPLC含量测定方法。　方法　采用HPLC法，色谱柱为Agilengt　Eclipse　Plus　C18　柱（4.6　mm×100　mm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（17︰83）；流速：0.6　mL/min；检测波长：327　nm。　结果　绿原酸在0.043　3～0.693　8　μｇ范围内线性关系良好（r　=　0.999　9），平均加样回收率为98.39%，RSD　=　0.58%（n　=　6）。　结论　本方法简便快速、结果准确，可较好地控制该制剂的质量。 　　[关键词]　珍杞降糖胶囊；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定 　　[中图分类号]　R927.2 [文献标识码]　A [文章编号]　1674-4721（2012）12（a）-0061-03 　　珍杞降糖胶囊为医院制剂，经过多年临床经验证明，其质量稳定，疗效可靠；由黄芪、玉竹、女贞子、金银花、珍珠母、赤芍、生地、郁金等9味中药材加工制成，具有益气养阴、生津止渴、凉血润燥之功效，主治阳??燥热型消渴病。绿原酸为金银花的主要有效成分，绿原酸具有抗菌、消炎、止血的功效，对珍杞降糖胶囊疗效的发挥起重要作用。现行质量标准中只有定性检查项目，而没有定量检测指标，本文采用HPLC测定了金银花中绿原酸的含量，方法简便、快捷、准确，回收率高，可较好地控制该制剂的质量。现报道如下： 　　1　仪器与试药 　　1.1　仪器 　　Agilengt　1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），AUW-220D电子分析天平（日本岛津公司），DSQ10260超声仪（上海特惠电子仪器有限公司）。 　　1.2　试药 　　绿原酸对照品（来源：中国药品生物制品检定所；批号：110753-200212）；水为杭州娃哈哈饮用纯净水，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。珍杞降糖胶囊（生产单位：市中医院；批号：110328、110507、110713）。 　　2　方法与结果 　　2.1　色谱条件及系统适应性试验 　　色谱柱：Agilengt　Eclipse　Plus-C18色谱柱（4.6　mm×100　mm）；0.4%磷酸-乙腈（83︰17）为流动相；检测波长为327　nm；柱温：30℃；流速为0.6　mL/min；进样量为10　μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于1　000[1]。 　　2.2　对照品溶液的制备 　　精密称取绿原酸对照品约10　mg，置50　mL容量瓶中，加50%甲醇30　mL，超声5　min使溶解，并定量稀释制成每1毫升中含绿原酸0.2　mg的溶液，作为对照品储备液（10℃以下保存）。精密量取上述储备液5　mL置25　mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 　　2.3　供试品溶液的制备 　　精密称取本品内容物约6.0　g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50　mL，、称定重量，超声处理（功率250　W，频率35　kHz）30　min，放冷，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5　mL，置25　mL棕色容量瓶中加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 　　2.4　阴性样品溶液的制备 　　精密称取不含金银花的其他各味中药材约6.0　g，研碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50　mL，称定重量，超声处理（功率250　W，频率35　kHz）30　min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10　mL，置50　mL棕色容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阴性对照溶液。 　　2.5　标准曲线的制备 　　取绿原酸对照品溶液（浓度为40　μg/mL），按“2.1”项下色谱条件分别精密进样1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00　μL，记录绿原酸色谱峰的面积值，以色谱峰峰面积为Y，以对照品进样量为X，计算回归方程：Y　=　5　442.127　16X-33.940　86，r　=　0.999　9。结果显示，在0.043　3～0.693　8　μｇ范围内绿原酸进样量与峰面积值呈良好的线性关系。 　　2.6　阴性干扰试验 　　按“2.1”项下色谱条件分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10　μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，结果绿原酸在4.054　nm波长处有最大吸收，理论板数在4　000以上，绿原酸峰与其他组分峰基线分离（R　＞　1.5），阴性样品溶液在绿原酸峰相应位置上对测定无干扰，见图1。 　　2.7　稳定性试验 　　按“2.1”项下色谱条件下，取绿原酸对照品溶液（浓度为40　μg/mL），每隔1小时进样1次，考察6次，每次10　μL，记录绿原