高三生物2010.07.23选三1.2基因工程基本操作程序PPT.ppt

;;;;;;;;;;ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC TATCGTACGATATTTACTTAAGCCGTATG;;目的基因;受体细胞;;（广东生物7）现有一长度为1000碱基对（by）的DNA分子，用限制性核酸内切酶Eco R1酶切后得到的DNA分子仍是1000 by，用Kpn1单独酶切得到400 by和600 by两种长度的DNA分子，用EcoRI、Kpnl同时酶切后得到200 by和600 by两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是（ ）;（天津卷30）下图为人β-珠蛋白基因与其mRNA杂交的示意图，①～⑦表示基因的不同功能区。据图回答：;;;;用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定发方法将目的基因的DNA片段分离出来。;;;利用PCR技术扩增目的基因;;;;;（1）导入植物细胞（受精卵或体细胞）;基因枪法： 10000个整合细胞/枪 气压 300-600米/秒 脱氧核糖核酸随机插入，原理不明;1987年，周光宇 中国的转基因棉花 原理不明;;;;普通质粒;;1.2.4 目的基因的检测与鉴定;1.2.4 目的基因的检测与鉴定;①目的基因产物是否出现;;;;;;;;（上海卷39）A、以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。 ⑴获得目的基因的方法通常包括_______ 和_________。 ⑵切割和连接DNA分子所使用的酶分别是______ 和____。 ⑶运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或 ，后者的性状呈 。 ⑷由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率 ，所以在转化后通常需要进行 操作。 ⑸将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和 序列上是相同的。;（海南卷26）（选修模块3：现代生物科技专题）; （2）用上述3种连接产物与任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是____________;接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________。 （3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是____________，其合成的??物是_________。 （4）在上述实验中，了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是____________________。 ;;;本实验所使用的载体质粒DNA为pBS,转化受体菌为E.coli DH5α菌株。由于pBS上带有Ampr 和lacZ基因,故重组子的筛选采用Amp抗性筛选与α-互补现象筛选相结合的方法。 　　因pBS带有Ampr 基因而外源片段上不带该基因,故转化受体菌后只有带有pBS DNA的转化子才能在含有Amp的LB平板上存活下来;而只带有自身环化的外源片段的转化子则不能存活。此为初步的抗性筛选。 　　pBS上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N端146个氨基酸的编码序列。这个编码区中插入了一个多克隆位点,但并没有破坏lacZ的阅读框架,不影响其正常功能。E.coli DH5α菌株带有β-半乳糖苷酶C端部分序列的编码信息。在各自独立的情况下,pBS和DH5α编码的β-半乳糖苷酶的片段都没有酶活性。但在pBS和DH5α融为一体时可形成具有酶活性的蛋白质。这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补。由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别，它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝色菌落。当外源片段插入到pBS质粒的多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失活, 产生的氨基酸片段失去α-互补能力, 因此在同样条件下含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成白色菌落。在麦康凯培养基上，α-互补产生的Lac+细菌由于含β-半乳糖苷酶，能分解麦康凯培养基中的乳糖，产生乳酸，使pH下降，因而产生红色菌落，而当外源片段插入后，失去α-互补能力，因而不产生β-半乳糖苷酶，无法分解培养基中的乳糖，菌落呈白色。由此可将重组质粒与自身环化的载体DNA分开。此为α-互补现象筛选。 ;抗生素：由真菌产生，能抑制或杀灭