10 细胞工程 第十章 动物细胞大规模培养技术PPT.ppt

用重组技术或细胞融合技术建立的工程细胞系，在进行无血清悬浮培养或高密度培养时，都需经过一定时间的细胞适应能力驯化。高细胞密度无血清悬浮培养的转化，可以导致细胞生长形成的转变和分泌蛋白特异性结构上的转变。随着血清浓度的减少或细胞生长添加剂的去除，细胞生长速率逐渐下降。另外，工程细胞分泌蛋白的糖结构形式，也常同时出现明显的改变，造成表达蛋白质的特异性改变。 通过驯化期可以逐渐修复那些不适宜的细胞群体，在驯化过程中监控并筛选那些具有优化性能特性（如细胞生长率、产生率、细胞死亡率、基因稳定性等）的细胞克隆或细胞群。 悬浮培养的驯化主要包括无血清培养条件的驯化、高细胞密度培养的驯化和贴壁生长转化为悬浮生长的驯化三个方面。 对贴壁生长细胞转化为悬浮生长细胞，其驯化的时间和难易程度各异。 以CHO细胞为例，由单层培养到悬浮培养驯化方法和过程主要分以下7步。 （1）用含有血清的标准培养液单层培养贴壁生长细胞，弃去培养液，用胰蛋白酶消化单层培养贴壁细胞，然后用灭菌的无钙、镁离子的PBS洗两次。 （2）弃去 PBS，加 3 mL（T－75培养瓶加 5 mL）的胰蛋白酶-EDTA消化液（0.5 g／L胰蛋白酶，0.53 mmol／L EDTA-2Na），在显微镜下观察，细胞开始变圆，轻拍培养瓶，使细胞脱落。 （3）加 6-10 mL悬浮细胞培养液，100 g离心 4 min，吸弃上清，用无血清培养液重