3专题1 课题1和2 基因工程的工具和基本操作程序PPT.ppt

意义：;操作环境： 操作对象： 操作水平： 实质： 结果：;1.1 DNA重组技术的基本工具;识别______________________________序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的__________断开。;;1、种类： 2、作用部位：;三、基因的运载体;复制原点：能复制并带着插入的目的基因一起复制;以质粒为例，了解运载体的特点;;;;;基因的结构;原核细胞的基因结构;真核细胞的基因结构;原核细胞与真核细胞的基因结构比较;基因文库的构建方法;② cDNA文库的构建-----逆转录法： ;思考？;真核细胞的cDNA的获取;;PCR技术的操作过程;PCR技术的操作过程;PCR技术的操作过程;反转录法;;;表达载体;基因表达载体的构建过程;注意：;;;;;;;2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（最多、最有效）;;;;;;1.2 基因工程的基本操作程序;杂交带：将待测的DNA样品酶切后，电泳处理，不同大小的片段分离，形成一条条层带（看不见），然后用醋酸纤维膜吸附，通过化学处理，再用放射性探针涂布、洗脱。探针就保留在该片段所在的层带。然后采用放射自显影技术，即含溴化银的乳胶（好像和胶卷显影一个原理）涂布，黑暗摆放，放射性元素衰变放射出的伽马射线使探针存在的层带呈现黑色，这些黑色层带即杂交带。 ;;;思考？;【高考警示钟】 1.目的基因的插入位点不是随意的 基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。 2.基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象 第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。;;基因工程的设计和施工都是在细胞水平上进行的（ ） 用限制酶切割一个DNA分子，获得一个目的基因，同时有两个磷酸二酯键被水解（ ） 在构建基因表达载体的过程中，通常要用同种限制酶切割质粒和目的基因，以得到相同的黏性末端，便于目的基因与运载体的结合（ ）;