SSR亲子鉴定技术PPT.pptVIP

亲子鉴定在水产动物遗传育种中的应用;2003年美国进攻伊拉克，在战争中众多尸首中虽然已面目全非，但运用DNA技术，最终证实萨达姆的两个儿子乌代和库赛战死。;目 录;一、亲子鉴定意义; 遗传标记;因此，用红细胞进行亲子鉴定，只能否定，不能肯定，也就是只能做亲权排除。;2.2 酶型;区带电泳 利用酶蛋白分子的电荷密度的差异，不同酶蛋白分子在介质中的迁移率不同，从而形成清晰的区带。 ;等电聚焦技术——根据酶蛋白分子的等电点不同，在pH梯度介质中，酶蛋白分子聚焦在相应的等电点pH位置上，形成狭窄而清晰的区带。 凝胶介质上酶区带的显现和鉴定酶蛋白分子经电泳分离以后，利用酶特异性的催化活性，使之显色，表现出特征性谱带，可据此作出同工酶型的判断。 ;酶谱技术：电泳和组织化学染色两种方法的联 合应用。;常见的其他几种多态性同工酶： 红细胞酸性磷酸酶（EAP） 酯酶Ｄ 谷丙转氨酶 乙二醛酶I 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 腺苷脱氨酶（ADA） ;2.3 白细胞的抗原（HLA）型;2.4 血清型;分型原理 免疫学的方法可以用来进行同种异型遗传标记的分型，以特异性的抗体检测同种异型抗原，确定遗传标记的型别。如红细胞被动凝集抑制试验、酶联免疫分析等。 血清型多数属于电泳性质上的多态性，需要采用凝胶电泳技术分型。;2.5 染色体型;2.6 DNA 指纹分析 ;2.6 微卫星 DNA（SSR）; SSR 技术较DNA指纹有更高的非父排除率和个人识别几率。SSR位点的总识别率为0.9999999999999935 ,累计非父排除为99. 999 %,在亲子鉴定中已达到很高的水平,因此被称为“第二代DNA 指纹”。 SSR 位点在人类基因组中广泛分布, 具有丰富的多态位点资源, 而且扩增STR基因座仅需要少量模板DNA。联合使用多个SSR 位点,可满足各种需要。基于以上优点,近几年人类做亲子鉴定多使用SSR 技术。;三、水产动物亲子鉴定的方法及应用;水产动物传统选育方法;传统物理标记方法的缺点： 需要个体长大一定大小时才能植入，之前各家系个体都必须分开单独饲养，从而消耗大量的物力和财力； 家系前期的单独饲养时，不同缸之间会产生环境效应，影响对家系遗传性状的评估，从而减小选育的效率和准确性； ???时耗力，限制了标记个体的数目，从而影响选育强度。;寻找一种方法：可以将不同家系个体从早期阶段就开始混合饲养，消除不同环境条件造成的环境效应，同时又可有效防止后代的近亲交配。 采用分子遗传标记做亲子鉴定，快速准确寻找不同家系后代的亲本。 ;微卫星标记具有的密度大、多态性丰富、高度杂合、稳定性好、遵循孟德尔分离定律、共显性遗传、易于PCR 扩增等特点使其成为了作为亲子鉴定的首选分子标记方法。 微卫星亲子鉴定方法已经广泛的用于鱼类遗传选育项目中。;SSR分子标记的开发;基于微卫星标记亲子鉴定方法下的鱼类选育项目;如何选择可作为亲子鉴定的微卫星位点;获取了子代的遗传信息后，结合亲本和子代的信息，用软件Cervus 3.0 作真实的亲子鉴定，寻找每一个后代的父母本来源。;♀;基因型分析;SSR标记（14个）;影响微卫星亲子鉴定的因素;影响微卫星亲子鉴定的因素;“结巴”带大多出现在重复单位为2 碱基的微卫星位点,并且通常比主带(长度n) 短数个重复单位( n - 2 ,n - 4 , ?) ,强度随着离主带距离的加大而减弱,出现几率则随重复次数的增多而增大。 ;PCR 反应过程中TaqDNA 聚合酶的复制滑脱是“结巴”带的主要成因;影响微卫星亲子鉴定的因素;多重PCR体系（multiplex PCR）;微卫星亲子鉴定在水产动物上的应用