VERO细胞培养PPT.pptVIP

细胞培养1;细胞培养技术;细胞培养目的和用途;主要内容;基本概念;cell line: 原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系。 如果不断继续传代或传代数有限，可称为有限细胞系（finite cell line） 如果可以连续传代，则可称为连续细胞系（continous cell line）或无限细胞系（Infinite Cell Line） 有恶性的无限细胞系：“恶性转化细胞系” 只具永生性而无恶性的细胞系：无限细胞系或转化细胞系:NIH3T3、Rat-1;细胞株;细胞周期;体外培养细胞的种类和命名;建立细胞系（或株）的要求;国内外相关细胞库 ;细胞库;ATCC;培养细胞的类型及其特点; 每代贴附生长细胞的生长过程;细胞接种后在培养液中呈悬浮状态 此时细胞回缩，胞体呈圆球形 10分钟～4小时;细胞附着于底物上，游离期结束。 底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等 血清中有促使细胞贴壁的糖蛋白（生长基质），这些促贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴壁因子的附着。 ; ;此时细胞有生长活动，而无细胞分裂 潜伏期：6～24小时;细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究 ;细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性 相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制（Contact Inhibition）。 当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制（Density Inhibition），导致细胞分裂停止 肿瘤细胞的接触抑制及密度抑制往往减弱或消失，因此细胞可向三维空间发展，导致细胞堆积，并可生长至较高的终末细胞密度。可作为区别正常与癌细胞标志之一。 ;1、无污染环境：保证细胞生存的首要条件 2、恒定的温度：36.5℃±0.5℃ 3、气体环境 ：95%空气，5%二氧化碳混合气体 4、细胞培养基 ：基础物质、生存环境(pH7.2-7.4、 渗透压) ;培养细胞的生存条件;实验准备;实验室设计;设备器材;准备室的设备：;培养室的设备：;压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：用干玻璃器皿消毒（160℃，2h） 滤器：过滤法除菌：大多数培养用液(人工合成培养基???血清、酶液等) 超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 紫外灯：用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 ;超净工作台;滤 器;CO2培养箱;数码型倒置荧光显微镜 CFM-550Z ;自动双重纯水蒸馏器 纯水仪; 酶标仪 微孔板震荡器;培 养 板;培养瓶;器械的清洗和消毒 ;实验器材处理;玻璃器械洗消;玻璃器械洗消;金属器械洗消;橡胶和塑料制品洗消;注意事项：;甲醛薰蒸：;细胞培养用液;细胞培养用液;平衡盐溶液（BSS）;作用----使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散 不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样 胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强 使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+ 的BSS，如：D-Hanks液 终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用（血清中含有抗蛋白酶成分） ;pH调整液;培养基;天然培养基：;合成培养基:;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ③激素 ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分 支持细胞生长需加 10％血清 ;血清质量好坏是实验成败的关键;无血清培养基;常用细胞培养基 ;抗生素的使用;完全培养基的组成;细胞培养用液的配制与消毒;RPMI1640培养基的制备