免疫生物学PPT.pptVIP

荧光SiO2纳米颗粒对间充质干细胞表面表达抗原CD44识别 研究背景 间充质干细胞（MSCs）是中胚层的干细胞, 这一类细胞可以通过体外贴壁培养加以分离, 然后分化为多种造血以外的组织细胞, MSCs 还易于外源基因的转染和表达, 因而可能是细胞治疗和基因治疗的理想靶细胞。 CD44 作为细胞表面跨膜糖蛋白, 也存在于间充质干细胞的表面, 主要参与细胞间的相互作用, 在细胞膜外的区域有多个潜在的N-糖苷键连接位点, 可以连接多种糖类分子, 是目前识别间充质干细胞的一个理想点位。 研究意义 利用包裹荧光染料的SiO2颗粒所制备的生化探针可以应用到很多检测领域, 检测目标包括生化环境的酸度、抗原-抗体结合特异性识别目标生物组分以及食物中的细菌。 应用包裹荧光染料的纳米SiO2颗粒进行间充质干细胞表面表达抗原CD44的识别, 从而成功实现了人脐带血中间充质干细胞的成像识别实验, 为应用荧光二氧化硅纳米粒子识别特异细胞奠定了基础。 研究进展 免疫研究中典型的纳米颗粒有纳米金，量子点，纳米TiO2，碳纳米管及介孔纳米材料等。 研究进展 2010年Ambrosi等将纳米金应用于ELISA中，实现了对肺癌生物标志CA15-3的超灵敏检测。该方法中，纳米金作为载体结合多个抗体，对信号检测实现了放大。灵敏度提高了一倍，大大缩短检测时间。 存在问题： 有少的研究认为它在一定尺寸下有生物毒性 ； 纳米金的生物相容性问题没有得到完全认可； 金纳米颗粒溶液为不稳定体系，会逐渐沉积。 量子点（QDs）与Ab偶联后得到的生物共轭体( QD-Ab) ，可作为荧光探针用于生物成像、免疫检测，从而达到病原菌检测，肿瘤的实时监测与治疗等目的。 QDs 的主要缺陷是它的细胞毒性，目前得到的量子点大多数含有重金属组分，如镉和铅等，进入生物体内后会产生细胞毒性，并对肝脏造成损伤。 研究进展 传统的生物发光标记材料( 如有机染料、金属和半导体纳米晶等) ，具有发射带宽、反斯托克位移较小和空间分辨率较浅等问题，且对生物组织有损伤，有背景荧光，荧光量少，荧光寿命短，光稳定性较差。 荧光二氧化硅纳米颗粒 优点：具较强的光敏感性和高度光稳定性； 具有良好的水溶性； 易于表面修饰及容易合成； 纳米二氧化硅无毒性； 缺点：纳米二氧化硅颗粒在应用时，表面要进行氨基、巯基或羧基等的修饰，这些修饰可能会改变颗粒的分散状态，从而影响其光敏感性、选择性以及重现性，尤其是颗粒聚集会影响到颗粒与检测目标的结合。 用荧光二氧化硅纳米颗粒连接抗体对间充质干细胞表面CD44 进行荧光显色并进行细胞成像，从而间接识别间充质干细胞。 研究内容 研究内容 1 荧光纳米二氧化硅粒子的制备及表面氨基修饰 2 纳米颗粒与抗体的连接 3 间充质干细胞（MSCs）的分离与培养 4 荧光纳米粒子标记间充质干细胞 5 纳米粒子的表征（倒置激光共聚焦显微镜分析连接抗体后的荧光颗粒分散性）