分子生物学4-2现代分子生物学的研究方法与技术PPT.pptVIP

第四章　翻译——从mRNA到蛋白质;4.2 蛋白质合成的过程;4.2.1 氨基酸的活化转运;氨基酸的活化必需组分： 20种氨基酸 20种氨酰-tRNA合成酶 20种或更多的tRNA ATP，Mg2+;4.2.2 核蛋白体循环 以原核生物中蛋白质合成为例，将核蛋白体循环人为地分为起始、肽链延长和终止三个阶段。 4.2.2.1 肽链的起始 4.2.2.2 肽链的延长 4.2.2.3 肽链的终止;起始因子 (initiation factor, IF) 参与蛋白质起始复合物的形成。 IF-1：促进IF-2和IF-3的活化。 IF-2：促进fmet-tRNAfmet与30S小亚基结合的作用，并有依赖核糖体的GTP酶活。 IF-3：使30S亚基释放，辅助mRNA与小亚基结合，并阻止大小亚基重新聚合。;起始复合物的形成： (1) IF-3和核糖体30S rRNA结合 使16S RNA和mRNA的SD序列结合 a.使30S 保持游离 b.形成起始复合体 I (2) IF-2 + GTP + 氨酰甲硫氨酸 中间复合体。 (3) IF-1置换出 IF-3, 50S亚基可和30S亚基结合。 (4) 50S+30S 复合体III，释放IF-1, IF-2。;Initiation prokaryotes;4.2.2.2 肽链的延长 肽链的延长必需组分： 功能核糖体（起始复合物） AA-tRNA 延长因子(elongation factor, EF) GTP，Mg2+ 肽基转移酶 ;延长因子 (elongation factor, IF) EF-Tu：与氨酰-tRNA及GTP结合形成EF-Tu . GTP.AA-tRNA，将氨酰tRNA转入A位，但它不能识别fmet-tRNA。 EF-Ts：在GTP供能时，使EF-Tu.GDP转变为EF-Tu.GTP. EF-G：依赖于核糖体的GTPase，使GTP水解，并有移位酶作用。; 肽链的延长具体过程包括： ; 以后肽链上每增加一个氨基酸残基，就按： ① 进位（新的氨基酸tRNA进入“A位”） ② 转肽（形成新的肽键） ③ 脱落（转肽后“P位”上的tRNA脱落） ④ 移位（核蛋白体挪动的同时，原处于“A位”带有肽链的tRNA随之转到“P位”） ;4.2.2.3 肽链的终止 肽链的终止必需组分： ATP mRNA上的终止密码子 释放因子(RF-1, RF-2, RF-3) ;终止因子 (termination factor, TF) 又称为释放因子(release factor, RF) 功能是识别mRNA上的终止密码子, 终止肽链的合成并释放出肽链。 RF-1:识别密码子UAA及UAG RF-2:UAA及UGA RF-3:结合GTP,并促进RF-1及RF-2与核糖体的结合。; 参与原核生物蛋白质合成的一些因子 ;4.2.3 真核生物与原核生物蛋白质合成的异同;4.2.3.2 核蛋白体 真核生物的核蛋白体（80S）大于原核生物。小亚基为 40S含有一种 rRNA(18S rRNA)；大亚基为60S，含有 3种rRNA（28S rRNA、5.5S rRNA 和 5S rRNA），所含的核蛋白体蛋白质亦多于原核生物。 原核生物小亚基16SrRNA的3′末端有一富含嘧啶的区段，可与其mRNA启动部位富含嘌呤的SD区互补结合。在真核生物相应的rRNA（18S rRNA）中，无此互补区。 ;4.2.3.3 tRNA 真核生物起着启动作用的氨基酸tRNA为不需要甲酰化的Met－tRNAMet。 原核生物中为fMet-tRNAfMet，系Met－tRNA fMet经蛋氨酰tRNA转甲酰基酸催化后的产物。 ;4.2.3.4 合成过程 启动 真核生物的启动因子（eIF）有9-10种，真核生物核蛋白小亚基先与Met－tRNA Met结合，再与mRNA结合，此时需要一分子ATP。 肽链延长 真核生物中催化氨基酸tRNA进入受体的延长因子只有一种（EFT 1）。催化肽酰tRNA移位的因子称为EFT 2，可为白喉毒素所抑制。 终止 真核生物只需一种终止因子（RF），此终止因子可识别3种终止密码子，并需要三磷酸鸟苷。原核生物的终止因子有3种。 哺乳动物类等真核生物线粒体中，存在着自 DNA到RNA及各种有关因子的蛋白合成体系，以合成线粒体的某些多肽。该体系类似原核生物蛋白合成体系。