长脾脏酪氨酸激酶的对乳腺癌细胞中细胞周期蛋白d1、id1、b—myb和fra1基因表达的抑制作用.doc

长脾脏酪氨酸激酶对乳腺癌细胞中细胞周期蛋白D1、ID1、B—myb和Fra1基因表达的抑制作用 2007年1月9日第87卷第期丛J- . 乳腺癌基础与临床? 长脾脏酪氨酸激酶对乳腺癌细胞中细胞 周期蛋白D1,ID1,B—myb和Fral基因 表达的抑制作用 王磊汪建平宋新明何裕隆 【摘要1目的筛选乳腺癌中长脾脏酪氨酸激酶[syk(L)]作为转录抑制因子下调的靶基因, 探讨Syk(L)在乳腺癌中的抑癌机制.方法采用CLONTECH公司的Adeno-x表达系统构建Syk 的腺病毒载体,感染不表达Syk的乳腺癌细胞系MB231,以腺病毒LacZ作为对照,采用cDNA微阵列 方法筛选Syk(L),Syk(s)调节的基因ID1,CyclinD1,Fral和B-myb的表达;并采用Northern杂交的方 法验证eDNA微阵列结果.结果在乳腺癌细胞中,转录抑制因子Syk(L)可下调癌基因IDI,Cyclin D1,Fml和B—myb的表达,Northern杂交证实了Syk(L)对它们的调节.结论抑癌基因Syk(L)通过 特异性下调癌基因CyclinD1,ID1,B.myb和Fral的表达抑制乳腺癌的发展. 【关键词】乳腺肿瘤;脾脏酪氨酸激酶;cDNA微阵列分析;癌基因 Spleen蜘kinase(L)suppressesbreastcancerdevelopmentbydownregulatingtheexpression ofcyclinD1,ID1,B-mybandFralWANGLei,WANGJian-ping,SO^『GXin—ming,HEYu-long. DepartmentofGeneralSurgery,FirstAffdiatedHospital,SunYat-senUnivemity,Guangzhou510080,China Correspondingauthor:WANGJian-ping.Email:wangjpgz@ 【Abstract】ObjectiveToscreenthetargetgenesregulatedbythetranscriptionalrepressorSyk(L) SOastoexplorethemechanismofSyk(L1insuppressingbreastcancer.MethodsAdeno-Xexpression systemfromClontechCompanyWasusedtoconstructtheadenovims-Syk.Syknegativebreastcancercellsof thelineMB231wereculturedandinfectedtlladeno—Syk(L),adeno-Syk(S),andthecontroladeno-Lac Zrespectively.cDNAmicroarrayWasusedtoscreenthegenesregulatedbySyk(L)andSyk(S).Northern blottingWasusedtoexaminethecDNAmieroarrayresults.ResultsThetranscriptionalrepressorSyk(L) Wasabletodown-regulatetheexpressionoftheoncogenesID1,cyclinD1,Fml,andB-mybinthebreast cancercells.Northernblottingconfirmedthisregulation.ConclusionSyk(L)suppressestheprogression ofbreastcancerbydownregulatingtheexpressionoftheoncogenesID1,cyclinD1,Fral,andB—myb. 【Keywords】Breastneoplasms;Spleentyrosinekinase;cDNAmicroarray;Oncogene 脾脏酪氨酸激酶(spleentyrosinekinase,Syk)在 乳腺癌中具有抑癌功能J.Syk的两种蛋白异构体 Syk(L)和Syk(S)在乳腺癌中均有表达,只有Syk (L)可移位到细胞核内并具有转录抑制功能引. 拟探讨Syk(L)作为转录抑制因子下调的靶基因,以 探讨Syk(L)抑制乳腺癌发展的可能性机制. 材料与方法 一 ,材料 pcDNA3.1(+)质粒购自Invitrogen公司,限制 性内切酶BamH1和Hindm购自NewEngland Biolabs公司,DMEM/F12细胞培养液购于美国 基金项目:教育部博士点基金资助项目(20020558050) 作者单位:510080广州,中山大学