赤点石斑鱼促甲状的腺激素tshβ启动子的克隆及其在斑马鱼胚胎原始性腺和垂体中定位表达.doc

赤点石斑鱼促甲状腺激素TSHβ启动子的克隆及其在斑马鱼胚胎原始性腺和垂体中定位表达 第34卷第4期 2010年7月 水生生物 ACTAHYDROBIOLOGICASINICA Vo1.34,NO.4 JU1.2010 D0I:l0.3724/SP.J.1035.20l0.00822 赤点石斑鱼促甲状腺激素TSHfl启动子的克隆及其在 斑马鱼胚胎原始性腺和垂体中定位表达 李辰昱汪洋周莉桂建芳 (中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉430072) 摘要:促甲状腺激素(Thyroid—stimulatinghormone,TSH)具有调节生长,发育,代谢和生殖的功能,但是在低 等脊柞动物中的功能研究较少.斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)促甲状腺激素TSHfl除在垂体中表达外还 在性腺中表达,进一步发现TSHfl也在赤点石斑鱼(inephelusakaara)性腺中表达.且在人工诱导的赤点石 斑鱼中,随着雄性化的转变,TSHfl转录水平升高.为研究石斑鱼TSHfl特殊表达方式的调控机制,采用基因 组步移技术扩增获得赤点石斑鱼TSHfl5端序列共5112bp.将1864bp核心片段顺向克隆到pBK.TOL2载体 中,pTSH~TOL2重组质粒与转座酶mRNA共注射斑马鱼一细胞期受精卵.Westernblot结果显示,在受精后 10h的尾芽胚中可检测到GFP的表达胚体晚期GFP表达量最高.荧光显微镜追踪观察发现,受精后 12—30hpf(Hourspostfertilization)观察到GFP在原始生殖细胞(PGC)X域表达;36hpf7dpf7~察到GFP除在 PGC区域表达外还在垂体中表达.由此可见,赤点石斑鱼TSHfl5I端1864bp的序列具有特异定位的启动子 活性 关键词:石斑鱼;TSHfl;启动子;GFP;PGC 中图分类号:$941文献标识码:A文章编号:1000—3207(2010)04—0822.06 早在1920年,促甲状腺激素(Thyroid—stimula— tinghormone,TSH)已被发现具有促进甲状腺生长的 功能llI2;后经研究显示,TSH为28—30kD的糖蛋白, 由0【和B两个独立亚基构成].Cc亚基非常保守,而 B亚基的功能随物种特异【4J.在哺乳动物中,垂体分 泌TSH,一方面受下丘脑分泌的促甲状腺激素释放 激素(Thyrotropin—releasinghormone,TRH)的促进影 响,另一方面又受到甲状腺素(Thyroidhormone)反 馈性的抑制影响oJ,二者互相拮抗,组成下丘脑. 垂体.甲状腺轴.TSH通过调节甲状腺的生长和功能 进而调节生长,发育,代谢和生殖一.TSH[3和其 受体在哺乳动物中已被深入研究,但在低等脊椎动 物中还鲜有报道. 赤点石斑鱼(Epinephelusakaara)与斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)隶属于属鳍科(Serranidae) 石斑鱼属(Epinephelus).由于生长快,食物转化迅速 以及市场销售价格高,因而潜力巨大[12];同时人工 繁殖与育苗技术难度也较大【1.最近几年,虽然在 人工繁育方面已经取得初步成果,但离稳定批量生 产种苗的目标尚有相当差距¨.低等动物中存在一 些性反转现象【1引,石斑鱼个体发育进程中存在先雌 后雄的性反转现象.尽管已经进行了一些繁殖生物 学研究以及运用激素诱导石斑鱼性反转的实验f】, 但主要集中于性腺组织学的研究[】,对性反转的分 子机制知之甚少.揭示石斑鱼性反转的分子机制, 发展生殖调控的高新技术,是解决制约石斑鱼养殖 业发展瓶颈的关键之一_l.为此,我们实验室已经 从斜带石斑鱼和赤点石斑鱼中鉴定了多个重要的与 性别分化和性反转相关的基因,如TSHfl[],GTHa, FSHflandLI4flE.们Sox3[,Dmrtl[和Cypl9a] 收稿日期:2009—05.31;修订日期:20l0-01.08 基金项目:困家973计划项目(NO2004CB117401);国家自然科学基金(NO.U0631007)资助 作者简介:李辰昱(1982一),男;硕士;主要从事鱼类发育遗传学研究.E-mail:1cy253@gmail.corn 通讯作者:梓建芳,E—mail:jfgui@ihb.accn 4期李辰等:赤点石斑鱼促甲状腺激素TSHfl肩动子的克隆及其在斑马鱼胚胎原始性腺和垂体中定位表达823 等,并对这些基因进行了表达特征和内分泌调控机 制研究引. 有趣的是,我们在研究斜带石斑鱼TSHfl时,首 次发现其TSHfl除在垂体中表达外还在性腺中表达, 且随着雄性化的转变,TSHfl转录水平升高【】.为进 一 步探讨TSHfl与性腺发育的关系,本