第13章DNA复制PPT.ppt

DNA的生物合成 (复制) DNA Biosynthesis，Replication ;中心法则;;复制(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。;复制的基本规律 Basic Rules of DNA Replication ;复制的特点： 复制的方式 ——半保留复制(semi-conservative replication) 复制的高保真性(high fidelity) 复制的方向：双向或单向复制 半不连续复制(semi-discontinuous replication) ;一、半保留复制的实验依据和意义;A G G T A C T G C C A C T G G;密度梯度实验 ;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。也有的生物的单向复制 。;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);真核生物每个染色体有多个起始点??是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 ;5’;三、复制的半不连续性;顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为前导链。 另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为冈崎片段(okazaki fragment)。 前导链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 ; 冈崎片段与半不连续复制（okazaki 1968年）;复制的引物; DNA复制的酶学 The Enzymology of DNA Replication;参与DNA复制的物质 ;一、复制的化学反应 ;聚合反应的特点;二、DNA聚合酶;5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |;（一）原核生物的DNA聚合酶;（一）原核生物的DNA聚合酶;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。;323个氨基酸;DNA-pol Ⅱ（120kD）;功能： 是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。 ;（二）真核生物的DNA聚合酶;（二）真核生物的DNA聚合酶;三、复制保真性的酶学依据;（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读;（二）复制的保真性和碱基选择;1. 遵守严格的碱基配对规律； 2. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 3. 复制出错时DNA-pol的及时校读功能。;四、复制中的分子解链及DNA 分子拓扑学变化 ;（一）解螺旋酶、引物酶和单链DNA结合蛋白;E. Coli 基因图;解螺旋酶(helicase) ——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链 引物酶(primase) ——复制起始时催化生成RNA引物的酶 单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整 ;;解链过程中正超螺旋的形成;拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;五、DNA连接酶;HO;DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。;DNA复制过程 The Process of DNA Replication;（一）复制的起始;E.coli复制起始点 oriC;;;（二）复制的延长; 5;前导链的合成;;阶段一;阶段三;复制过程简图;原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。;;哺乳动物的细胞周期;? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。