第7章 RNA遗传 - 副本PPT.ppt

分子遗传学 Molecular Genetics第7章 RNA遗传中国医科大学医学遗传学教研室李福才2013.3;第7章 RNA遗传;RNA遗传; 然而，RNA编辑、RNA干扰的发现与研究，更使我们对RNA的遗传作用刮目相看。 著名的分子生物学家Pennisi指出：“基因占据生物学的舞台已经数十年。但最近的工作提出，虽然基因经常是挂牌的名角，可它们更像一些木偶。各种蛋白质，有时是RNAs，在拉着线，告诉基因在何时何地打开或关闭”。;7.1 RNA世界——生命早期的遗传物质; 结果，多聚化过程是逼真的；在引物被扩展11个核苷酸的情况下，对此等序列进行了克隆和序列分析，在1100个样品中有1088个是与模板标准匹配的。如表7.1; Bartel等使用存在于随机RNA序列的备用池中的RNA-连接酶ribozymes衍生物。某些衍生物能够使用NTP及RNA模板的部分区域进行模板指导的引物延伸。这些连接酶衍生物通过与模板的不配对的以特异小段的杂交来识别并催化该引物---模板复合体的RNA复制。从使用的模板的一小段来指导引物延伸来看，这些ribozymes不像复制RNA/DNA的酶的多聚化反应，更类似于末端酶。;; 从上述可知，W.K.Johnston等所描述的RNA复制虽然效率不高，却是真正的RNA自我复制。因为它不像DNA复制那样，需要许多蛋白酶来进行加工。而这里的RNA复制，它不需要任何蛋白质，完全由RNA酶(ribozymes)及RNA模板完成。 而通常的DNA/RNA病毒的复制以及细胞DNA复制都不是由纯粹的DNA或RNA系统完成的。因此，RNA无疑地是一种复制模板。图7.3;RNA复制实验;7.2 RNA干涉/扰;RNAi作用机制： 在不同的生物中，不同来源的双链RNA(dsRNA，约500bp)被DICER（含有螺旋酶，helicase，dsRNA结合域，及PAZ功能域）裂解为一种具特异序列的有活性中间体---21~23nt的双链siRNA（small interfering RNAs或guide RNAs）。 然后，siRNA结合核酸酶复合物（RISC的蛋白质部分）形成RNA诱导复合物（RNA-induced silencing complex,RISC）。激活的RISC依靠siRNA中的一条链（Guide Strand）去寻找互补的mRNA链，然后RISC中的核酸内切酶（ Augonate2, Ago2）在距离siRNA3＇端12bp的位置切割mRNA。 ;RNAi的分子遗传机制; dsRNA被转换为特异序列中间体（R）,然后引起同源的mRNA??解/沉默。rde-1及rde-4为从dsRNA产生R所需要，mut-7及rde-2则被需要来响应R使靶mRNA沉默。;7.2.2 siRNA的产生与扩增; 首先dsRNA被切成短的siRNA,使dsRNA转换成ssRNA。这些单链正常的siRNA如果没有识别同源的靶mRAN，并与之配对，就会被降解。 一旦反义的siRNA与靶mRNA配对，则靶-指导的siRNA的扩增就会发生。这时，与靶mRNA配对的siRNA小段将沿mRNA延伸，但只能延伸几百个碱基左右就停止，并从该区裂解下来而成为次级siRNA。这种效应称之为“可迁移效应”。 ; siRNA与靶mRNA的稳定化与“可迁移效应”的结合就形成了一个“连式反应”，在这个反应中，随着Dicer的作用，primer siRNA的更新，以及新的一轮扩增，将发生siRNA的多轮的复制。 应该注意到，这种复制或扩增并不是自我复制/扩增，而是从primerA产生primerB, primerC, primerD,…这是从一个局部延伸为全体，再从全体裂解为若干局部的过程。;7.2.3 RNAi的遗传; 线虫（C.elegant）实验(图10)： 1）注射dsRNA; 2）把虫子泡在含有dsRNA溶液中； 3）或者喂以正在表达有义及反义RNA的微生物。; 将dsRNA注射到线虫两性体，在子一代（F1）产生的基因沉默（RNAi）往往在F2消失。但是，在母性生殖系中，由RNAi引起的基因抑制，可以偶尔地遗传到 F2及以后各代中（图7.8）。 Grishok等证明，如果RNAi在母体启动，它可以通过F1的精子传到F2，尽管该精子缺乏RNAi的靶基因。所以，RNAi一旦启动，即使在缺乏内源靶基因的情况下,雄性生殖系细胞能够传递RNAi 。 因此，RNAi性状是后生的，可遗传的。它并不需要通过基因序列的改变----突变。;7.3 RNAi 对基因表达的作用