第一章 酶的基础知识2PPT.ppt

　酶 工 程Enzyme engineering;第一节? 酶学概论;第一章???? 酶的基础知识;第二节?? 酶的作用机理一?、 酶的活性中心二、? 酶的专一性的机理三、? 高效性的机理;一?、 酶的活性中心 1.酶活性中心的概念 2.酶活性中心的结构特点 3.研究酶活性中心的方法;①结合部位（ Binding site）： 指酶分子中与底物结合的部位或区域。底物靠许多弱键与酶结合。 此部位决定酶的专一性 ②催化部位（ catalytic site ）： 指酶分子中促使底物发生化学变化的部位称为催化部位，底物的键在此被打断或形成新的键。 此部位决定酶的催化能力和反应的性质。;2.酶活性中心的结构特点;（2）酶的活性部位是一个三维实体 （3）酶的活性部位和底物的结合是一个动态辨认过 程（诱导契合，induced-fit） （4）酶的活性部位位于酶分子表面的一个裂隙（crevice）内，裂隙内是一个相当疏水的环境， 从而有利于同底物的结合 （5）底物靠许多弱的键力与酶结合 （6）酶活性部位具有柔性或可运动性;;;频率最高的活性中心的氨基酸残基：Ser、His、Cys、Tyr、Asp、Glu、Lys。 不需要辅酶的酶：活性中心是由酶分子在三维结构上比较靠近的少数几个氨基酸残基或是这些残基的某些基团组成 。 需要辅酶的酶：辅酶分子或辅酶分子的某一部分结构往往就是活性中心的组成部分 ;;酶蛋白;下列关于酶的活性中心的叙述哪些是正确的?A. 所有的酶都有活性中心B. 一个酶只有一个活性中心C. 所有酶的活性中心都有辅酶 D. 酶的必需基团都位于活性中心点内E. 所有酶的活性中心都含有金属离子F. 所有抑制剂都作用于酶的活性中心 －－－－－－上海交大;别构效应物与酶结合的部位是:a. 活性中心的底物结合部位b. 活性中心的催化基团c. 酶的-SHd. 活性中心以外的特殊部位e. 活性中心以外的任意部位 －－－－上海交大 ;3 研究活性中心的方法 （1）酶的专一性研究 （2）酶分子侧链基团的化学修饰法 （3）X射线晶体衍射法 （4）定点诱变法;3 、 研究活性中心的方法 （1）酶的专一???研究 通过研究酶的专一性底物的结构特点，来判断和确定活性中心的结构特点，来判断和确定活性中心的结构。另外，研究酶的竞争性抑制剂的必需结构以及酶与专一性底物的相近关系也有助于了解酶活性中心的结构。 ;3 、 研究活性中心的方法 （1）酶的专一性研究 （2）酶分子侧链基团的化学修饰法 （3）X射线晶体衍射法 （4）定点诱变法;3 、 研究活性中心的方法 （2）酶分子侧链基团的化学修饰法 ;酶分子可以被化学修饰的基团很多，如巯基、羟基、咪唑基、氨基、羧基和胍基。; ; ;② 特异性共价修饰;一些酶活性部位的氨基酸顺序; ③ 亲和标记法 这类修饰剂的结构类似于底物结构，有两个特点： 可比较专一的引入酶的活性中心 具有活泼的化学基团如卤素，可与活性中心的某一基团共价结合，使酶被修饰 因其作用机制是利用酶对底物的特殊亲和力将酶加以修饰标记，故称为亲和标记。 活性部位指示试剂;胰凝乳蛋白酶;3 　研究活性中心的方法 （1）酶的专一性研究 （2）酶分子侧链基团的化学修饰法 （3）X射线晶体衍射法 （4）定点诱变法;（3）X射线晶体衍射法 该法可解析酶分子的三维结构，有助于了解活性部位氨基酸残基所处的相对位置与实际状态，以及与活性部位有关的其他基团；研究酶与底物结合模式。;3 　研究活性中心的方法 （1）酶的专一性研究 （2）酶分子侧链基团的化学修饰法 （3）X射线晶体衍射法 （4）定点诱变法; （4）定点诱变法 如将胰蛋白酶Asp102诱变为Asn102，突变体水解酯的活性仅为天然酶的1/10000，可见Asp102对胰蛋白酶催化活性是必需的; 再如，羧肽酶A中的Tyr248原认为催化所必需，1985年Gardell等人把Tyr248的密码子（TAT）变为Phe的密码子（TTT）。发现突变酶的kcat值和天然酶一样，但其Km值高出6倍。 ;;第二节?? 酶的作用机理一?、 酶的活性中心二、? 酶的专一性的机理三、? 高效性的机理;二、? 酶的专一性的机理; （二）酶作用专一性的机制 ;;：;潜手性专一性有些酶对在有机化学上属于对称分子中的两个等同的基团，只催化其中一个，而不催化另一个。如：;酶作用专一性的机制 ;