临床生物化学实验室技术与管理PPT课件.ppt

临床生物化学实验室基本技术与管理 ; ; ;第一节 光谱检验技术;利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。 根据物质对光谱响应特征的不同，可把光谱检验技术分为发射光谱分析技术、吸收光谱分析技术和散射光谱分析技术三大类。 在临床生物化学检验中，光谱分析是一类十分重要的技术，应用极为广泛。它既可以研究物质的结构分析，也可以对特定物质进行定性或定量的分析。;一、吸收光谱分析法;2.测定方法 在可见-紫外分光光度法中，通常在测定未知样品浓度的同时，与同一个已知浓度的标准物作比较，可以利用以下公式计算而求出其浓度,即比较法。 因为As= KCsb　Ax= KCxb 其中A为吸光度， C为溶液的浓度，其下标s、x分别表示属标准物、待测物；k为常数，b为比色杯的光径。;用比较法定量时，选用的标准品溶液的浓度若接近于样品溶液的浓度，可减少误差。;若将一系列浓度不同的标准液按照一定操作过程显色后，分别测吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。从标准曲线找出相对应的待测样品的浓度，即标准曲线法。;4.分光光度法的建立;图2-1吸收光谱图;二、发射光谱分析法;荧光分析法（fluorometry）;荧光分析法（fluorometry）;荧光分析技术的应用;第二节、电化学分析技术;电化学传感器在临床生化分析的应用中占据着主导的地位。其原理是将电极浸入待测溶液中组成原电池，其中一支电极的电极电位与待测离子的活度有关，此电极称为指示电极；另一支电极是电位已知并且恒定的所谓参比电极,目前最常用的参比电极有甘汞电极和银-氯化银电极。这里主要介绍离子选择电极分析法。;离子选择电极法的原理;离子选择电极法的原理;ISE的特点;离子选择性电极的分类;由于离子选择电极在技术方面的优越性和制造技术的进步，电极的稳定性和寿命大大增强，有的电极还是免维护的，因此，最新临床化学分析系统倾向于多电极组合和智能化。电解质、血气和酶电极（主要是葡萄糖、尿素和乳酸传感器）集中在同一台设备中，犹如一个小型实验室。利用这种设备，同一标本一次便可以完成所有的???试。同时也可以有选择地做其中的某一项或几项测定。;第三节 电泳技术; 电泳技术应用广泛，在生物化学实验技术中占有重要地位，主要用于蛋白质、核酸等的分离、鉴定和定量。;电泳技术的原理;电泳类型及应用;（一）. 醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate electrophoresis）;（一）. 醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate electrophoresis）;（二）. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE）;聚丙烯酰胺凝胶兼有电泳支持介质及分子筛的功能，大大提高了分离能力，是目前分辨率最高的电泳支持介质。它能精细地分离各种蛋白质组分。在蛋白质的电泳中，为了使被测物质的泳动速率的大小完全取决于分子量，在电泳系统中加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS)以消除或减少电荷对蛋白质移动的影响。 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于：蛋白质分子的分离鉴定、蛋白质分子量的测定、核酸的分析（非解离体系）、核酸的序列测定（解离体系）以及尿蛋白电泳等诸多方面，是目前最常用的电泳技术之一。;（三）等电聚焦电泳 ;反之，溶液pH高于蛋白质的等电点时，蛋白质呈负电性，在电场中向正极移动，最终也将停在pH等于pI处。只有当溶液的pH等于蛋白质的等电点，为电中性，蛋白质在电场中才不移动。利用蛋白质的这个性质，将其放在由两性电解质形成的pH梯度中，可以依不同蛋白质的等电点不同，达到分离的目的。;等电聚焦电泳的优点;第四节、常用免疫分析技术;随着单克隆抗体的开发和使用、各种标记技术的发展使得免疫学进入了一个新的时期。由于免疫分析技术具有特异性好、快速、灵敏度高等，使得其应用范围十分广泛，在临床生物化学中可以对内分泌激素、蛋白质、多肽、核酸、神经递质、受体、肿瘤标志物、血药浓度等血清微量物质进行定量测定。;一、免疫比浊分析;(一)散射免疫比浊分析;散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物越多，散射光强度越强。散射比浊法分析是免疫比浊分析中最常用的一种方法。;（二） 透射免疫比浊分析;（三） 免疫比浊分析的临床应用;补体C3、C4反应补体的消耗情况；前白蛋白（PA）可作为营养不良和肝功能不全的指标；AAT缺乏者可发生年青人肺气肿、新生儿和成人肝损害；TRF用于贫血的鉴别诊断；急性时相反应蛋白C-反应蛋白；载脂蛋白A和B（Apo A，Apo B）；尿微量蛋白和一些小分子量的治疗性药物浓度等。;二、酶免疫分析;二、酶免疫分析;酶免疫分析的原理;在测定时，把待测