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酶工程(mi)PPT课件
; 酶工程 引 言;酶工程的发展趋势
随着生物技术的发展,酶工程将引起发酵工业和化学合成工业的巨大变革。21世纪酶工程的热点和前题,可能包括基因工程和蛋白质工程的应用,人工合成酶和模拟酶、核酸酶和抗体酶,分子酶学,酶的定向固定术,杂交酶,分子发动机,酶化学技术,非水酶学,糖生物学和糖基转移酶,酶标药物,端粒酶,极端环境微生物和不可培养微生物的新酶种, 酶在环境保护方面的应用等。;细 胞 融 合 ; 酶工程5 酶工程 ; 微生物作为酶生产来源的优点
生长繁殖快,生活周期短,产量高,酶比活很高;
培养方法简单,原料来源丰富,经济效益高;
微生物菌株种类繁多,酶的品种齐全;
可以通过诱导、诱变及基因工程等方法培育出新的产酶量高的菌种。;5.1.2基因工程菌(细胞)的构建
构建基因工程菌的目标
改善原有酶的各种性能
扩充可安全使用的酶源
; 酶基因克隆及表达的基本步骤
能产生目的酶的生物
酶的纯化 总m RNA的纯化
测定N端部分氨基酸序列 mRNA
设计引物 RT-PCR
与合适的载体重组、重组子筛选与鉴定
转入工业生产用的宿主(工程菌或工程细胞),如米曲霉
酶的工业化生产
; 克隆酶基因的宿主-载体系统应具备的特性
所希望的酶占细胞总蛋白量的比例要高;
菌体容易大规模培养,生长无特殊要求;
载体与宿主相容,且能在宿主中稳定维持;
宿主的蛋白酶尽可能少;
宿主菌对人安全,不分泌毒素。
;5.1.3 微生物酶的发酵生产
5.1.3.1 培养基
碳源
氮源
无机盐类
生长因子
pH值 ;5.1.3.2 酶的发酵生产方式
固体发酵法
液体深层发酵法
温度
通气和搅拌
pH值 ;5.1.3.3 提高酶产量的措施
添加诱导物
酶的作用底物
酶的反应产物
酶的底物类似物 ;降低阻遏物浓度
表面活性剂
添加产酶促进剂
; ;
5.2.1 酶制剂的制备
破碎细胞
溶剂抽提
离心分离
浓缩
干燥
;5.2.2 酶的纯化与精制
5.2.2.1根据酶分子大小和形状的分离方法
离心分离
差速离心
速率区带离心
等密度梯度离心
; 酶工程5.2.2.1 根据酶分子大小和形状的分离方法;介质的特性
类型 工作范围(相对分子质量) 床体积/(ml/g干胶)
葡聚糖凝胶
Sephadex G-10 200 2~3
G-15 150
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