吸光光度法3.pptVIP

化学分析：常量组分(1%), Er 0.1%～0.2% 依据化学反应, 使用玻璃仪器 光学光谱区 朗伯-比尔定律的适用条件 单色光 应选用?max处或肩峰处测定 2. 吸光质点形式不变 离解、络合、缔合会破坏线性关系 应控制条件(酸度、浓度、介质等) 3. 稀溶液 浓度增大，分子之间作用增强 4）选择适当的光度测量条件 有机显色剂 二. 准确度—仪器测量误差 光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。 提高光度测定的灵敏度和选择性的途径 合成性的灵敏度高的显色剂 采用分离富集和测定相结合 采用三元（多元）配合物显色体系 9.5 吸光光度法的应用 1. 单一组分测定 3) 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6) 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。 2. 多组分的测定 3.一元弱酸离解常数的测定 4. 络合物组成的测定 1:1 9.1 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系. 吸收曲线—定性分析的基础。 定量分析的基础—朗伯-比尔定律：A=?bc=-lgT 式中各参数的物理意义，定量计算。 9.2 了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基本部件。 9.3 灵敏度的表示—摩尔吸光系数的意义和计算； 准确度—适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。 9.4 显色反应及条件的确定: 显色剂用量、酸度、时间、温度、干扰及消除。 9.5 应用: 单一组分测定示例、多组分测定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。 习题 一、选择题 1、光度分析中，用1cm的比色皿测得的透光率为T,若组分的浓度增加一倍，则透光率为： A、T2 B、T/2 C、2T D 、T1/2 2、有色配合物的摩尔吸收系数ε 与下列哪个因素有关 A、 比色皿厚度 B、有色络合物浓度、C、入射光波长 D、络合物的稳定性 3、 相同质量的Ti（Ⅳ）和Mo（Ⅵ）（Ar=47.88, Ar=95.94),各用一种显色剂在同样体积溶液中显色，用分光光度法测定，前者用2 cm 比色皿，后者用1cm比色皿，测得的吸光度相同。则两有色络合物的摩尔吸收系数的关系约为： A、基本相同 B、 Ti（Ⅳ）为Mo（Ⅵ）的两倍 C、 Mo（Ⅵ） 为Ti（Ⅳ）的两倍 D、 Mo（Ⅵ） 为Ti（Ⅳ）的四倍 4、 在符合朗伯-比尔定律的范围内，某一有色物的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是： A、 增加、 增加、 增加； B、减小、不变、减小； C、 减小、增加、增加； D 、增加、不变、减小； 5、吸收光谱曲线的横坐标是（ λ ）,纵坐标是（ A ）。工作曲线的横坐标是（ c ）,纵坐标是 (A ) §9.4 吸光度测量条件的选择 9.4.1 选择适当的入射波长 一般选择λmax为入射光波长。 若λmax 处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。 如图选500nm波长测定，灵敏度虽有所下降，却消除了干扰，提高了测定的准确度和选择性。 实际上就是以通过比色皿的光强度作为样品池的入射光强度。 9.4.2 参比溶液的选择 重 点 选择参比溶液所遵循的一般原则： ⑴ 若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸 收，其他所加试剂均无吸收，用纯溶剂（水)作参 比溶液； ⑵ 若显色剂或其他所加试剂在测定波长处略有吸收, 而试液本身无吸收，用“试剂空白”(不加试样溶液) 作参比溶液； ⑶ 若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸 收，则可用“试样空白”(不加显色剂)作参比溶液； ⑷ 若显色剂、试液中其他组分在测量波长处有吸收, 则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再 加显色剂，作为参比溶液。 光度分析的误差来源于两方面：一方面是各种化学因素引入的误差；另一方面是仪器测量不准引入的误差。对于化学因素，前面巳经讲过，现在我们来看仪器测量不准引入的误差。 9.4.3 吸光度读数范围的选择 一．仪器测量误差： 任何光度计都有一定的测量误差，测量误差的来源主要是光源的发光强度不稳定，光电效应的非线性，电位计的非线性，杂散光的影响，单色器的光不纯等等因素， 对于一台固定的光度计来说，以上因素都是固定的，也就是