单抗系列培训完整版课件.pptVIP

实际应用 单克隆抗体被广泛应用于农业、医学及其他生物领域，并发挥越来越重要的作用。 1.　检测微生物 1.1　检测特异的病毒　 单克隆抗体具有高灵敏性和高特异性,在鉴定菌种和病毒等的群特异性、种特异性、型和亚型特异性,乃至株特异性方面独具优势,且能鉴定寄生虫不 同生活周期的抗原性,常用于疫病检疫、诊断、免疫监测和流行病学调查等。 （1）植物病毒单克隆抗体的研制主要应用于植物病毒和病害检测及株系鉴别。 （2）在动物病毒单克隆抗体的研制方面，用于疫病诊断。 1.2　鉴定细菌种类及亚型, 或测其耐药性　 1.3 检测寄生虫或其他病原体 冯秀丽等(2007)用提取的禽致病性大肠杆菌1型菌毛免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,对46株带有1型菌毛的禽致病性大肠杆菌优势血清型分离株进行检测表明，该单克隆抗体都能与之发生特异性反应。王崇义等(2006)用单克隆抗体标记乳胶凝集试验快速检测金黄色葡萄球菌及其耐药性，具有较高灵敏度和特异性。 陈心春等(2007) 将人隐孢子虫超粉碎后,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，经流式细胞术检测其反应性表明，该单抗对隐孢子虫胞内和胞外的检测无差异。孙晓林等(2008)将纯化的猪带绦虫六钩蚴45W-4BX重组抗原免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，结果表明所获单抗能满足常规试验的要求，可用于带绦虫六钩蚴45W-4BX抗原的组织定位。 2.　检测微量成分 用单克隆抗体进行酶标免疫测定或结合同位素进行放射免疫分析，可用于检测体液内微量成分(如激素)的含量，用以判断机体内分泌功能状态是否正常或判断前期治疗效果；也可用于快速检测瓜果蔬菜、食品等农产品的农药残留,外环境水体的农药污染情况，及保证对公共卫生应急事件的检测。 2.1 检测机体内微量成分 如 检测 γ-干扰素 2.2　检测药物残留 3. 确定免疫机制,分析抗原结构,定位病原组织 单克隆抗体由于其与抗原结合的特异性及检测过程中逐级放大的特点，可以精确定位和定量抗原,是免疫学和血清学研究的重要工具,被广泛用于酶联免疫吸附试验（ ELISA）、流式活化细胞分选仪(FCS)、免疫印迹和免疫组化研究中，其灵敏度可达到微克(μg)水平，可利用它更全面、更细微地分析抗原结构,特别是分析细胞表面的小分子抗原，对分析体内免疫反应机制、判断机体免疫水平和免疫调节平衡状态具有重要的实际意义。 4.　在肿瘤诊疗中的应用 （1）在医学诊断方面,单克隆抗体可用于肿瘤的诊断、分型和定位；可区分不同细胞的亚群和分化阶段，了解细胞的来源、分布和功能，以制定有效的治疗方案；可用于主要组织相容性抗原HLA系统的分型和ABO等血型的鉴定。 （2）在临床治疗方面,单克隆抗体可作为被动免疫而用于治疗；也可作为载体与各种类型的细胞毒制剂结合，直接导向定位于肿瘤细胞以提高抗体的疗效，降低细胞毒制剂的非特异性毒性反应；同时,单克隆抗体还可作为预防手段，用于骨髓移植和器官移植,以预防或治疗移植物抗宿主病(GVHD)、排斥反应及肿瘤细胞的致病作用。 5.　用于蛋白质的提纯 单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质上，并制备成层析柱，当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液，便可得到欲纯化的抗原。 Thank you for your time and attention！ * * * * 3. 为什么融合后得不到阳性克隆？ （1）动物未免疫成功就进行了融合。 （2） 融合后得到的克隆较少，故得到阳性克隆的机率也较小。 （3）筛选克隆手段不正确。例如有些小分子物质不可以直接包被到酶标板上，再如使用了不适当的二抗等诸多因素，也有人直接不使用 ELISA 作为筛选方法的，成功率也有待商榷。 （4）抗原成份与细胞培养条件中的物质相同或类似，或者与筛选过程中有同抗 原结构相同或类似的物质产生了竞争反应。如果需要制备抗 BSA 的单抗，则养杂交瘤的培养基中不可以使用牛血清，否则牛血清中的 BSA 直接与抗体相结合，最后做 ELISA 筛选的时候无法得到阳性结果。解决的办法只有使用其它的动物的血清或者使用无血清培养基。再如，如果需要制备酪蛋白的单抗，则做 ELISA 筛选时，二抗的稀释液不可以使用脱脂奶粉。 （5） 其它所有能影响 ELISA 等相关筛选手段的因素。 4 . 为什么细胞生长很慢？ （1）使用了劣质的培养耗材、培养基、血清、HAT 或 HT。建议新手使用知名厂商的试剂或耗材。对于血清，可能需要从多个厂家选用多个批次试用，选