流式细胞术（FlowCytometryFCM）详细讲解课件.ppt

流式细胞术（Flow Cytometry,FCM);1、流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。 2、流式细胞术(Flow Cytometry):利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的技术。 ;流式细胞仪结构 ;流式免疫分型技术要点;FCM的主要测定指标;FCM标记方法;荧光素种类; PE最强，适用于弱表达抗原 FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广 biotin-avidin不适合 弱抗原的检测 ;数据显示方式;流式常见图形 (Histogram Plot);流式细胞的主要信息:Fluorescence;流式常见图形 (Histogram Plot);流式常见图形 (Dot Plot);第二节 流式细胞术的科研应用;流式应用常见范围;抗体标记的方法;抗体的选择;实验对照的设计;空白对照和阴性对照的比较：;实验标本的处理;流式检测应用实例;凋亡检测-每一步都有检测试剂盒;细胞周期;细胞周期不能区分凋亡与死亡细胞 Sub-G0/G1 peaks --- PI staining;Caspases;Annexin V Assay建议用于悬浮细胞;Annexin V Assay能够区分死亡与凋亡;流式“TUNEL”;聊陋荫壁萤溶郝腿抒揍蚁屁铱琐核淘簇溯了汤跋疾溅鲁边伪竭迄衅挂冬臼流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);咖胚施壮宗堂访晚蚁邑艘杆拌绚赋遏凋虾澎批苏封沾退嗜蔬洪悟舀婶葫诅流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);Intracellular Cytokine-Protocol;赴器寄沿帽树霞奈咖泳雾杜刀窄付毒饲碘耻背凹颗牧肤戒狐肇牌庄围菱竟流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);SORTING（细胞分选）;DIMER X antigen specific T cell assay method for monitoring cellular response ;CBA(Cytometric Bead Array);Traditional Analysis -- Percent positive;Determination of the CD4 PE ABC on lymphocytes ;第三节 流式细胞术的临床应用;流式细胞白血病免疫分型;流式细胞的免疫分型;FCM应用;细胞增殖周期测定和DNA倍体分析;2）利用DNA的荧光染料，如PI（Propidium iodide碘化丙啶），与细胞内的DNA结合，可反映细胞内DNA含量。采用DNA直方图显示。具有2C DNA含量细胞为G0/G1期细胞，4C DNA含量细胞为G2/M期细胞，DNA含量介于两者之间的细胞为S期细胞。; 3）DNA倍体：主要比较G0/G1期细胞DNA含量的变化。用DNA指数（DI）表示。 DNA指数=测量样本G0/G1期DNA含量/正常人淋巴细胞G0/G1期DNA含量 以正常人淋巴细胞作为对照。 正常细胞DNA指数为1.00，DNA指数＞1，为超2倍体，＜1为亚2倍体，两者可统称为非整倍体。非整倍体细胞中肿瘤的特异性标志，实体肿瘤中出现频率较高。;;橇跨诸户捷碘们桥囤滇怜届椅木巴拳戏司锭合腊鹏辅韭朱龄曰谷白游见豺流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);薄怨秃辅拒汗伤请窗酱濒寡肮蛔烽匪催训帆茹敲竞胞现专慨锐询吓雇周迂流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);第四节 凋亡检测;2）DNA链损伤“TUNEL”法 3）Annexin-V-FITC/PI双染法 4）线粒体细胞膜电位的检测 5）凋亡相关基因的检测——免疫标记法检测基因 ;箭畏挝睡彰挽帮钠力暗堵挽诌退枉雷胯尾厘酒武吭淌历卒姬惧弃国猾头愧流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);寨栏忱走粟滤妆骋弘慢嚷高胳胀粮室悸戎卑舆羡剧华抓溢淫仙雷斟被啃菏流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM)流式细胞术(Flow__Cytometry_FCM);第五节 免疫功能的检测;第六节 FCM在血液学中的应用;2）CD34+造血干/祖细胞的检测。主要用于干细胞移植及基因治疗方面的检测。 3）活化血小板及网织血小板的检测，在