伤寒杆菌感染模型微生物学与免疫学检验系列实验.pptVIP

伤寒杆菌感染模型的微生物学与免疫学检验系列实验 东南大学基础医学院病原生物学与免疫系 伤寒杆菌感染模型的微生物学与免疫学检验系列实验 设计目的与意义 系列实验内容及其安排 系列实验内容及其安排 * 伤寒的微生物学与免疫学检验有典型及示范意义 微生物学检验与免疫学检验并存 不同的病程采取采集不同标本 血液标本— 绝对无菌的标本 粪便标本—含正常菌群的标本 1．肥达试验结果观察 2．考核：完成并上交实验报告 7 标本的免疫学检验—肥达试验 第3周血清提前1天，另安排时间采集 肥达试验：第1周血清/第3周血清 6 标本的细菌学检验3 1. 血液标本： l?血清凝集/最终鉴定 5 标本的细菌学检验2 1.血液标本：挑取普通平板上菌落 l?继续观察生长情况 l?GS染色镜检 l? KIA、IMViC接种 2. 粪便标本： 血清学玻片凝集试验/ 最终鉴定 4 标本的细菌学检验1 1. 血液标本： l?观察生长情况（混浊等现象）l?转种普通平板（分区化线法） 2. 粪便标本：挑选SS平板上可疑菌落 l?GS染色镜检 l?KIA、IMViC接种 l?纯培养（普通平板、分区化线法） 3 感染小鼠标本采集与接种 1. 血液标本：l? 接种增菌培养基 l? 分离血清，置-20度保存（肥达试验用） 2. 粪便标本：接种分离培养基（SS平板） 2 1. 总体内容讲解 2. 伤寒杆菌感染模型建立 l? 实验分组：1只小鼠/人 l?感染模型建立：灌胃接种伤寒杆菌培养液 1 1．肥达试验结果观察 2．考核：完成并上交实验报告 7 标本的免疫学检验—肥达试验 第3周血清提前1天，另安排时间采集 肥达试验：第1周血清/第3周血清 6 标本的细菌学检验3 1. 血液标本： l?血清凝集/最终鉴定 5 标本的细菌学检验2 1.血液标本：挑取普通平板上菌落 l?继续观察生长情况 l?GS染色镜检 l? KIA、IMViC接种 2. 粪便标本： 血清学玻片凝集试验/ 最终鉴定 4 标本的细菌学检验1 1. 血液标本： l?观察生长情况（混浊等现象）l?转种普通平板（分区化线法） 2. 粪便标本：挑选SS平板上可疑菌落 l?GS染色镜检 l?KIA、IMViC接种 l?纯培养（普通平板、分区化线法） 3 感染小鼠标本采集与接种 1. 血液标本：l? 接种增菌培养基 l? 分离血清，置-20度保存（肥达试验用） 2. 粪便标本：接种分离培养基（SS平板） 2 1. 总体内容讲解 2. 伤寒杆菌感染模型建立 l? 实验分组：1只小鼠/人 l?感染模型建立：灌胃接种伤寒杆菌培养液 1 因病程不同采取不同标本 伤寒的微生物学和免疫学检验 微生物学检验 免疫学检验 查抗体 查病原 第1周 —血液 第1-3周—骨髓液 第2周— 取粪、尿液 动态 —血液—血清 伤寒的微生物学—血液标本 血液标本微生物学检验的基本原则 血液是无菌标本：采集、运送、接种等全过程严格执行无菌操作 增菌培养、纯培养的培养基：不能使用选择/抑制性培养基， 而用营养培养基 培养鉴定出任何细菌都要报告（排除污染菌） 菌血症是严重的临床症状，要及时与临床沟通、随时报告检验进展 （特别是药物敏感试验的初步报告） 血液标本的检验程序 需氧培养 传统方法或自动血液培养仪指示有菌生长 血液标本（无菌采集） 厌氧培养 增菌 培养 直接涂片 染色镜检 需氧培养及CO2培养 分离 培养 直接药敏试验 厌氧培养 挑选菌落 纯培养 直接涂片 染色镜检 药敏试验 血清学试验 生化反应 报告 伤寒的微生物学—粪便标本 粪便标本微生物学检验的基本原则 粪便是含正常菌群的标本：注意接种标本的选取 分离培养、增菌培养的培养基：使用强选择/抑制性培养基 粪便标本微生物学检验的核心：可疑菌落的选择 粪便标本 SS琼脂平板培养基 粪便标本的检验程序 报告 可疑菌落 直接涂片染色镜检 KIA、IMViC、MIU 药敏试验 血清学鉴定 其他生化鉴定 粪便标本的检验程序 SS琼脂平板： 成分及其原理 基础性成分：牛肉膏、蛋白胨、琼脂 抑制性成分：硫代硫酸钠、硫代硫酸钠、煌绿、胆盐等 抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群生长 鉴别性成分：