肿瘤标志物分子诊断.pptVIP

核酸分子杂交（固相杂交）操作程序 流式细胞仪仪器结构 液流系统 光学系统 激光光源 光收集系统 电子系统 光电转换 数据处理系统 细胞分选系统 * * 肿瘤的分子诊断技术 　　　 肿瘤的诊断及分子诊断 诊断肿瘤的金标准：病理诊断， 问题：很多时候等到能够得到病理诊断的时候，肿瘤分 子已经扩散或者肿瘤组织太大无法手术从而失去 早期治疗的机会。 早期诊断肿瘤的技术和方法是科学研究者一直致力的方向。 肿瘤的分子诊断： 实际上是利用各种技术在分子水平对肿瘤标志物的检测和确认。 肿瘤标志物 （Tumor Marker, TM) 概念: 1)肿瘤组织和细胞由于癌基因或者抗癌基因和其他肿瘤相 关基因及其表达产物异常表达所产生的抗原或者其它生 物活性物质，而在正常组织或者良性疾病时候有一定程 度表达或者产量甚微，它反映了癌组织的发生和发展过 程及肿瘤相关基因的激活或者失活的程度，可以在肿瘤 患者的组织、体液和排泄物中检出。 2)此外，在患者机体中，由于肿瘤组织浸润正常组织，引 起机体免疫功能和代谢异常，产生一些生物活性物质和 因子，虽然这些物质的特异性低，但与肿瘤发生和发展 有关，也可用于肿瘤的检测，因此也将其称为肿瘤标志 物。肿瘤标志物的性质大多数是蛋白质或者多肽、也有 的是DNA或者是RNA、还有的是微量元素。 检测TM的基本原则：和常规检测蛋白质、核酸及小分子的原理基本一致，所以，可以说常用的定量或者定性的方法都可以用于检测肿瘤标致物。关键在于如何选择适合临床开展的方法。分子生物学技术的发展大大推动了对肿瘤标志物的发现和检测。 　　　　　　肿瘤标志物的分类 (l)原位性肿瘤相关物质：在同类正常细胞含量甚微，而当细胞 癌变时迅速增加，如各种癌细胞内的酶。 (2)异位性肿瘤相关物质：是由恶变的肿瘤细胞产生，不是同类 正常细胞的组分，如异位性激素、在肺癌时促肾上腺皮质激 素(ACTH)明显升高。 (3)胎盘和胎儿性肿瘤相关物质：癌细胞的特点是无限增殖，并 向周围组织侵袭和转移，甚至向远隔组织转移，而胎盘绒毛 细胞和胎儿组织细胞也有这样的特点。当胎儿成长后，有一 些物质就消失，如果成人组织细胞发生癌变，这类胎盘性或 胚胎性物质就会产生或表达癌胚性物质，如AFP、CEA；癌 胎盘性物质，如hCG(人绒毛膜促性腺激素)等。 (4)病毒性肿瘤相关物质：凡能在人或动物引起肿瘤或细胞恶性转 化的病毒，均称为肿瘤病毒。与肿瘤有关的病毒有HTL-1病毒 (成人T细胞白血病)、EB病毒(Burkitt淋巴肉瘤)、HPV(宫 颈癌与皮肤癌)、HB病毒(肝癌)和人巨细胞病毒等。 (5)癌基因、抑癌基因及其产物：各种致癌因素诱发基因激活和抑 癌基因失活及其表达产物异常，是肿瘤发生、发展的重要标志。 常用于肿瘤的分子诊断的技术 一、酶联免疫吸附、免疫比浊法和蛋白印渍技术 二、核酸的分子杂交技术和基因芫片技术 三　蛋白贈芯片及蛋白廄学技术 四、免疫荧光技术及流式细胞仪 五、PCR技术 六、其它 一、酶联免疫吸附、免疫比浊法和蛋白印渍技术 检测对象：蛋白质分子 　　虽然这几种方法操作最后的检测方式不同，可是其基本原理相同，即都是利用抗原抗体特异性反应检测样本中的蛋白质(定量或者是定性)，所不同的是在于它们在最后的检测及操作方法上的差异。 1. 酶联免疫吸附剂测定 （Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA） 基本原理是： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 在测定时， 把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按 不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 2) 用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开， 3) 最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 4) 加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 　由于酶的催化频率很高，故可