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蝉花多糖超声波辅助提取工艺优化 　　摘要：以去离子水为提取剂，采用单因素试验和正交试验考察了提取时间、提取温度和料液比对蝉花（Cordyceps cicadae）多糖提取率的影响。结果表明，蝉花多糖的最佳提取工艺条件为提取温度70 ℃、提取时间30 min、料液比1∶20（m/V，g∶mL），在这个条件下蝉花多糖提取率为2.37%。 　　关键词：蝉花（Cordyceps cicadae）；多糖；超声波；提取；正交试验 　　中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）20-4598-03 　　蝉花（Cordyceps cicadae）为麦角菌科蝉拟青霉。研究表明其主要含多糖、氨基酸等多种物质，具有调节免疫、调节脂质代谢、解热镇痛、镇静催眠等多种作用[1]，其中多糖含量约占2%～3%[2]。 　　有关蝉花多糖提取方法的研究较多，它们均采用水提醇沉法、微波辅助提取法[3-5]，但是只是单纯提取，有关蝉花多糖提取工艺的优化未见报道。研究采用单因素试验和正交试验考察提取时间、提取温度、料液比对蝉花多糖提取率的影响，旨在筛选出蝉花多糖的最佳提取工艺，为蝉花的开发利用提供一定的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 原料与药品 野生蝉花子实体采集于江西省庐山风景名胜区，采后洗净，烘干粉碎过80目筛，粉末备用。葡萄糖、苯酚、浓硫酸、乙醇均为分析纯。 　　1.1.2 主要仪器 TDL-40B低速台式大容量离心机和TDL-50B低速台式离心机购自上海安亭科学仪器厂，721可见分光光度计购自天津普瑞斯仪器有限公司，DW-40L92立式低温保存箱购自青岛海尔特种电器有限公司，KQ3200E型超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 蝉花多糖的提取工艺 称取蝉花粉末2.00 g，按照一定的料液比加去离子水，用超声波辅助提取蝉花多糖，以4 000 r/min离心15 min得上清液，加入3倍体积的体积分数为95%的冰乙醇，置冰箱过夜。以4 000 r/min离心15 min，所得沉淀即为蝉花粗多糖[4]。 　　1.2.2 除蛋白质的方法 采用Sevag法[4]除蛋白质。 　　1.2.3 蝉花多糖浓度的测定 采用硫酸-苯酚法[4]。将葡萄糖配制成一系列标准溶液，于490 nm处测定吸光度，得到葡萄糖浓度C与吸光度A的回归方程为A=0.005 3C-0.009 5（r=0.999 0）。将蝉花粗多糖除蛋??质后，用去离子水溶解定容至100 mL，摇匀，从中移取2.5 mL于25 mL容量瓶，加去离子水至刻度，取样液2.0 mL于具塞试管中，加入60 g/L苯酚溶液1.0 mL，再加入浓硫酸5.0 mL，按标准曲线制作的相同方法进行多糖浓度的测定。将测得的吸光度A代入标准方程，计算出样品的蝉花多糖浓度。多糖提取率=蝉花多糖的质量/蝉花质量×100%。 　　1.2.4 单因素试验 分别考察提取温度40、50、60、70、80、90 ℃，提取时间10、30、50、70、90、110 min，料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60（m/V，g∶mL，下同）对蝉花多糖提取率的影响。 　　1.2.5 正交试验 根据单因素试验结果，采用L9（34）正交试验筛选蝉花多糖的最佳提取工艺，因素与水平见表1。 　　1.2.6 验证试验 根据1.2.5的试验结果重复进行3次试验。 　　2 结果与分析 　　2.1 单因素试验结果 　　2.1.1 提取温度对蝉花多糖提取率的影响 由图1可知，不同提取温度对蝉花多糖提取率的影响显著。提取温度为40～70 ℃时，蝉花多糖提取率随提取温度的增加而增大，在提取温度为70 ℃时提取率达到最大值。随着提取温度的进一步增大，蝉花多糖提取率反而有所下降。这是因为随着提取温度的上升，蝉花多糖分子运动速度加快，有利于蝉花多糖的渗出、溶解和扩散，但提取温度太高会影响蝉花多糖分子结构的稳定性，加速蝉花多糖类化合物的分解，从而影响了提取率。因此，选择60～80 ℃为适宜的提取温度。 　　2.1.2 提取时间对蝉花多糖提取率的影响 由图2可知，随着提取时间的增加，多糖提取率也逐渐增加，当提取时间达到50 min时，多糖提取率达到最大值，此后多糖提取率又有所降低。这可能是由于在一定时间范围内，提取时间越长，提取溶剂与多糖作用时间越长，有利于多糖类物质的释放。但提取时间过长，提出的部分多糖物质在溶液中被分解，反而使得提取率降低。因此，选择30～70 min为适宜的提取时间。 　　2.1.3 料液比对蝉花多糖提取率的影响 由图3可知，当料液比达到1∶20时，多糖提取率达到最大值且趋向稳定，即溶剂用量增到一定浓度后，由于蝉花中多糖大都已被提取出来