[DOC] 高效毛细管电泳电导分离-检测亮氨酸对映体.docVIP

高效毛细管电泳电导分离-检测亮氨酸对映体 第25卷第12期 2006年l2月 分析试验室 ChilleSeJournalofAnalysis V01.25.No.12 20o6一l2 高效毛细管电泳电导分离.检测亮氨酸对映体 黄宝美,张爱华,姚程炜.,谢天尧,莫金垣 (1.绵阳师范学院化学系,绵阳621000;2.中山大学化学与化学工程学院,广州510275; 3.中国气动中心第四研究所,绵阳622653) 摘要:以未涂层融硅石英毛细管(50cmx75/_trn)为分离柱,2mmol/LNaAc+2 mmol/LHAc+0.5mmol/LCu2(pH4.O)作为电泳运行液,分离电压l5kV,建立 了亮氨酸对映体的高效毛细管电泳一电导分离检测的方法.对缓冲溶液的种 类,浓度,分离电压,有机改性荆等因素对分离的影响进行了讨论.L一亮氨酸 和D一亮氨酸的线性回归方程分别为:Y=5.998p+40.677,Y=3.605p+ 42.087.线性范围:L一亮氨酸4.0～160nag/L;D一亮氨酸6.0160mg/L.检出 限分别为:1.5和2.0mg/L. 关键词:毛细管电泳;亮氨酸;电导法 中图分类号:0657.8文献标识码:A文章编号:10oo-o72o(2oo6)12—051—03 亮氨酸是人体必需的氨基酸之一,其中D一 亮氨酸是一种重要的有机手性源,主要应用于手 性药物,手性添加剂,手性助搅等领域,在制药行 业作为手性合成的手性源,作为一种光学活性的 有机酸,在某些手性化合物的不对称合成过程中 具有不可替代的作用,目前主要用于生产新型广 谱抗生素,D一亮氨酸,多肽合成过程的亮氨酸保 护剂.L一亮氨酸用于营养增补剂,调味增香剂, 降低血糖剂,植物生长促进剂.因此在医药工业 上亮氨酸的对映体拆分是一个不可缺少的环节. 文献报道拆分亮氨酸常用的方法有:超滤膜拆 分…,液相色谱法拆分_2],薄层色谱拆分_3],气相 色谱拆分H].其中薄层色谱法效率低,需多次重复 操作制备,且所用的手性试剂一般难以得到,不 便反复使用;液相色谱法拆分,一般需要柱前样 品衍生化,且柱子昂贵,色谱柱易污染而报废;在 气相色谱法中,由于氨基酸含有羟基,羧基和氨基 等极性基团不易挥发,因此需要将其衍生为易挥发 的非极性化合物以便于分离,衍生过程不仅费时 麻烦,而且有可能使被分析物发生消旋,从而影 响分析结果b].目前未见毛细管电泳电导法拆分 收稿日期:2006-01—20;修订日期:2006-05-08 作者简介:黄宝美(1979一),女,讲师 D,L一亮氨酸的报道,电化学检测(主要是安培检 测和电导检测)具有操作简单,维护方便,无须衍 生化处理等优点(由于大多数氨基酸缺乏光学活 性,光检测需进行柱前或柱后衍生化处理才能检 测),对于未衍生化氨基酸对映体的分离检测具有 特殊的优势_6].考虑到氨基酸的电活性差,而电导 检测具有通用性,作者采用高效毛细管电泳一电 导法,以2mmol/LNaAc+2mmol/LHAc+0.5 mmol/LCu(Ac)(pH4.0)的电泳介质中,实现了亮 氨酸对映体的分离检测. 1实验部分 1.1仪器与试剂 毛细管电泳一电导检测系统(CE—CD)为自组 装,高压电源(CZE3OPNlO/McNz2,美国Spellman HighVoltageElectronicsCorporation),电导检测器 (中山大学电分析室研制);毛细管电泳数据站(中 山大学电分析室研制);PHS一3C精密酸度计(上 海电光器件厂);石英毛细管柱50cmx75tani.d. (河北永年光导纤维厂),CQ一2B型超声波清洗器 (明珠电器有限公司). D,L一亮氨酸(上海科学院生物化学研究所产 一 5l一 第25卷第12期 2006年12月 分析试验室 Ch— i— neseJournalof—— Analysis1.almratory V01.25.No.12 2006—12 品,层析纯),L一亮氨酸(L—Leu,上海科学院生 物化学研究所产品,层析纯),cu(Ac):,NaAc, HAc,HPO4,磷酸钠,柠檬酸钠,柠檬酸,乙酸 钠,冰醋酸,硼砂,甲醇,乙酸铵,NaOH,以上试 剂均为分析纯;所用水为二次蒸馏水. 1.2缓冲溶液和样品溶液的配制 分别配制100mmol/L的NaAc,HAc,Cu(Ac)2, Na2B407.10H2O,KI-I2PO4,Na2HPO4,Tris,H3BO3, 柠檬酸的贮备液,各取适量配成不同浓度比的体 系.D,L一亮氨酸配制成1mgCmL的贮备液,进样 时用缓冲稀释到所需的浓度. 1.3实验方法 连接好毛细管电泳仪和检测装置,毛细管柱 在使用前依次用0.1mol/L的NaOH溶液,水,缓 冲液各冲洗约3min.电极在使用