内毒素诱导大鼠心肌损伤时EPO及EPOR表达实验研究.docVIP

内毒素诱导大鼠心肌损伤时EPO及EPOR表达实验研究 　　[摘要] 目的 观察内毒素诱导大鼠心肌损伤时EPO 及EPO受体表达。 方法 20只雄性SD大鼠随机分为LPS组和对照组，LPS组腹腔注射生理盐水，连续处理 3 d后腹腔注射LPS 10 mg/kg，建立内毒素心肌损伤模型。对照组与LPS组腹腔注射等量生理盐水。腹腔注射6 h后于鼠尾部放血测定心肌损伤标志物，断颈活杀取出心脏组织测定EPO 及EPO受体浓度。 结果 LPS组血清心肌损伤标志物（cTnⅠ、CK、CK-MB）水平均显著高于对照组（t = 6.751、5.346、3.432，P 　　[关键词] 内毒素；心肌损伤；促红细胞生成素；促红细胞生成素受体；动物实验 　　[中图分类号] R363.1+4 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）18-0008-03 　　脓毒症是临床常见危重病之一，脓毒症已成为世界上ICU患者死亡的主要原因，脓毒症休克患者死亡率高达46.5%[1]。严重脓毒症时心肌抑制的发生率高达 80%，发生心肌损伤达 40%，严重影响患者的预后[2]。细菌产生的内毒素释放入血是脓毒症发生的关键，内毒素可诱导机体出现全身炎症反应综合征从而造成多脏器损伤，特别是引起心肌抑制和心肌损伤，而目前对于脓毒症心肌抑制和心肌损伤尚无有效的治疗方法。促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是一种糖蛋白造血细胞生长因子，主要由人体中的肾小管周围毛细血管床的间质细胞产生，EPO与促红细胞生成素受体（EPOR）结合调控红系干细胞增殖、分化、成熟，促进网织红细胞释放入血的生物学作用。近几年的研究发现[3]，在发生贫血、缺氧、急性损伤等情况下则能够对 EPO 及其受体的产生起到负反馈调节作用。因此，本课题组于2009年11月～2010年1月通过内毒素诱导大鼠心肌损伤，并采用ELISA法测定心脏组织中EPO及EPOR浓度，以探讨其可能的保护机制。 　　1材料与方法 　　1.1药品与试剂 　　脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS， L2880）、3-去氮腺苷（3-deazaadenosine）、EPO（CSB-E04539 m）及EPO受体（CSB-E0732l m）均为 Sigma公司产品，ELISA试剂盒购自武汉华美生物工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯，水为去离子水。 　　1.2 实验动物 　　健康雄性SD大鼠20只，（体重300～320 g，SPF级，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供），??清洁级大鼠的要求标准饲养。20只大鼠随机分为脂多糖（LPS）组和对照组各10只。LPS组腹腔注射生理盐水，连续处理 3 d后腹腔注射LPS 10 mg/kg，建立内毒素心肌损伤模型[4]。对照组与LPS组腹腔注射等量生理盐水。 　　1.3观察指标 　　①心肌损伤标志物测定：腹腔注射6 h后于鼠尾部放血约0.5 mL/只，低温3000转/min离心15 min分取血清，置-20℃冰箱保存备用待测心肌损伤标志物，包括：心肌肌钙蛋白I（cTnⅠ）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量，采用ELISA检测心肌损伤标志物的浓度，检测方法严格按照试剂盒说明书进行。②EPO及EPOR浓度的测定：腹腔注射6 h后鼠尾部放血后立即断颈活杀取出心脏组织于-20℃保存，然后取心肌组织标本在冰冻条件下研磨，制备心肌组织匀浆液，采用ELISA检测EPO及EPOR浓度，检测方法严格按照试剂盒说明书进行，反应终止后用酶标仪在450 nm测定A值，先测得样本的A值，根据标准品的浓度及A值计算出EPO及EPOR的相对浓度。 　　1.4 统计学处理 　　计量资料用均数±标准差（x±s）表示，应用SPSS 13.0数据分析软件进行数据分析，各组间EPO及EPOR和心肌损伤标志物（cTnⅠ、CK、CK-MB）比较采用t检验，以P 　　人类EPO基因由 166 个氨基酸残基组成，定位于 7 号染色体长臂 22 区（7q22），体内EPO主要由低氧诱导产生，肾脏分泌入循环。EPO的作用是维持红细胞造血前体细胞的存活并促进其分裂，诱导晚期红系祖细胞生长成为成熟的红细胞[11]。EPO促进红细胞生成的生物学效应主要是通过位于骨髓红系祖细胞表面的特异性 EPO 受体来完成的，EPO及EPOR结合发挥生物活性，激活多种信号转导途径发挥抗凋亡作用[12]。据研究报道[13]，EPO及EPOR的高表达可能与多种恶性肿瘤的发生和发展、新生血管生成有着密切的关系；此外，EPO及EPOR信号途径在生理及病理的促进心、脑损伤修复等多方面起重要作用[14]。近年来，EPO 参与胚胎的正常发育、促进血管生成、组织保护作用、抑制炎症反应、抗氧化作用