第四章薄层色谱.ppt

TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变化的物质的分离。 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样和展开剂用量少，展开速度快。 TLC经常被用于探索柱色谱分离条件和监测柱色谱过程 。 在进行化学反应时，可利用薄层色谱观察原料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。 4.2 薄层色谱操作 一、薄层板的制备 1.固定相 a.未改性固定相 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 氧化铝—有碱性、中性、酸性 硅藻土—为化学中性吸附剂 纤维素—天然多糖类 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形成氢键的物质有特别的选择性 手工简易涂铺 二、薄层板活化 涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前在适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。不同薄层板活化条件略有不同，如： 硅胶 110℃ 1h 氧化铝 110℃ 30min 4.3 薄层色谱参数 一、保留参数 1. Rf值 用来表征斑点位置的基本参数是比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L0 4.4 流动相与固定相 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留和分离选择性决定于三个因素： 4.5 薄 层 扫 描 一、原理 薄层定量方法可分为 直接法——测定照射光照射色谱后，因被测物斑点的存在引起的透射光和反射光的变化。 间接法——将部分照射光的能量转换成较长波长的荧光，即荧光测量。 注意：薄层色谱定量测定的光学方法是基于测量斑点和薄层空白处光学响应信号的差值。 各种薄层扫描仪 4.6 定性、定量方法 一、定性方法 1.利用保留值 测定Rf值 测定相对Rf值，即Rx值。 利用二维色谱（改变色谱条件，比较Rf值是否一致） 4.7 应 用 一、可用于判断两个化合物是否相同（同一展开条件下是否有相同的比移值）。 二、可用于确定混合物中含有的组分数。 三、可用于为柱色谱选择合适的展开剂，监测柱色谱分离状况和效果。 四、可用于监测反应过程。 应用举例： 药物鉴别 例:在毒物分析中检验是否巴比妥安眠药中毒时，取胃内容物或尿样品，先用盐酸酸化后，用乙醚提取，乙醚提取液脱水，过滤蒸干，溶于无水乙醇中，点在硅胶板上用氯仿-无水乙醇（36：1）展开，用硫酸汞二苯偶碳酰肼试剂显色，并用标准品对照，依次见出巴比妥，苯巴比妥，戊巴比妥和异巴比妥。鉴别速度快（1小时），这对于抢救中毒患者和及时为医生提供治疗方案极为重要。 监测反应 例:在合成强力霉素的过程中，需要中间体甲烯土霉素氢化为脱氧土霉素。 可用薄层检查氢化反应是否完全，如果反应完全，则反应釜中几乎没有或只有极少量的甲烯土霉素存在，薄层板上只显示出一个脱氧土霉素，如果薄层板上有两个明显的斑点，表示反应还没有完全，直到只显示出脱氧土霉素的一个斑点为止才能出料。 TLC应用于农产品和食品中生物碱类、氨基酸、碳水化合物、油脂等的检测。 TLC用于农药残留、兽药残留、毒素等的检测。如：牛奶和肉类中的氨比西林，食用油中的杂环氧化物，食品中色素等。 毒素检测采用TLC的国家标准包括：黄曲霉毒素B1（谷物，GB/T5009.22-2003）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素Vomittoxin）（谷物，GB/T14929.5－1994）、赭曲霉毒素A（OA）（谷物，GB13111-91）、黄曲霉毒素M1（鲜奶，GB/T5009.24－1996）、杂色曲霉素（植物性食品，GB/T5009.25—2003）、展青霉素（PTL）（苹果和山楂，GB14974－94）。 　　 b. 一种成分的色谱行为会受到混合物中其他成分的影响，这种影响的大小取决于混合组分的种类、浓度等因素。 这种影响一般使分配系数变小。如两个相邻斑点中后面的一个比移值较其单独展开时为大。 二、固定相的活度及其调节 在其它因素一定时，活度增加，Rf值减少。可通过预吸附溶剂分子，调节其表面活性。 例如可将活化薄层板放在相对湿度恒定的空间里来达到调节活度的目的。 实际工作中常常使固定相预吸附一定量单一或混合溶剂蒸气，预吸附量越大，溶剂前沿运动速度越快，被测物质斑点的Rf值越大。 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的Rf值小，称为边缘效应。 在层析过程中发生的边缘效应就是由于活度变化引起的。尤其是使用混合溶剂时，极性较低和沸点较低的溶剂，在薄层边缘容易挥发，使边缘部分的展开剂中极性溶剂的比例增大，Rf相对增大。 若在展开前先将展开槽与薄层板用展开剂蒸气饱和后再展开，边缘效应可消失。 预吸附中 展开中 采用双槽层析缸进行饱和 边缘效应示意图 二、测量方式 1.吸光度测量——测定的是漫反射光。适合于