第一节 核酸.pptVIP

1928年，英国 Griffith S型肺炎球菌：有荚膜，菌落表面光滑，致病 R型肺炎球菌：没有荚膜，菌落表面粗糙，不致病 结果说明：加热杀死的S型肺炎球菌中一定有某种特殊的生物分子或遗传物质，可以使无害的R型肺炎球菌转化为有害的S型肺炎球菌 这种生物分子或遗传物质是什么呢？ 1944年，美国细菌学家Avery（1877－1955）及其同事的研究结果发现：转化因子就是DNA， DNA是生命的遗传物质 纽约洛克非勒研究所 Avery 从加热杀死的S型肺炎球菌将蛋白质、核酸、多糖、脂类分离出来，分别加入到无害的R型肺炎球菌中 结果发现，惟独只有核酸可以使无害的R型肺炎球菌转化为有害的S型肺炎球菌 1944年 结论：DNA是生命的遗传物质 1952年，Hershey 和 Chase 病毒（噬菌体） 放射性同位素35S标记病毒的蛋白质外壳，32P标记病毒的DNA内核，感染细菌。 新复制的病毒，检测到了32P标记的DNA，没有检测到35S标记的蛋白质， DNA在病毒和生物体复制或繁殖中的关键作用。 8年的时间 1958年Crick，提出“中心法则” 1970年，Smith和Ｗilcox发现限制性内切酶 1973年，Cohen获得第一个体外重组体 1975年，Sanger发明酶法DNA快速测序 1985年，Millus发明PCR技术 真核生物 在细胞核中高度卷曲双螺旋，与组蛋白组成染色体 线粒体、叶绿体ＤＮＡ不与组蛋白结合 原核生物 位于核区，环状分子 mRNA：(messengerRNA) 信使RNA 三　RNA在蛋白质合成中的作用 1、戊糖 2、碱基 稀有碱基 嘌呤——次黄嘌呤、1-甲基次黄嘌呤、N2、N2-二甲基鸟嘌呤。 嘧啶——5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、二氢尿嘧啶、4-硫尿嘧啶 都是基本碱基的化学修饰型。 tRNA中含有较多的稀有碱基 3、核苷与核苷酸 核苷酸 核酸一级结构的简写形式 线条式缩写 大 部 分 DNA 所 具 有 的 双 螺 旋 结 构 ， 亦 称 为 B 型 在 真 核 及 原 核 细 胞 皆 有 证 据 显 示 短 的 Z 型 DNA 存 在 。 双螺旋结构的稳定因素 提问：起稳定作用的有 哪些力呢？ 碱基堆积力 将所有碱基堆积起来，使水分子排除在这样的表面之外，从能量角度看最稳定 不溶于水的非极性分子在水中相互联合，成串结合的趋势力成为碱基间的部分堆积力 碱基间的氢键 DNA双螺旋结构生物学意义 第一次阐述了遗传信息的储存方式及DNA复制的机理，以准确的语言回答了DNA是如何成为遗传物质的。大大推动了分子生物学和分子遗传学的发展，被誉为20世纪最伟大的发现之一。 最主要的成就是碱基互补（配对）。根据碱基互补，Watson和Crick提出DNA的半保留复制机制。半保留复制保证了亲代与子代性状的相似性，解释了遗传性状的稳定性。 原核生物以及真核生物细胞器环状DNA的超螺旋三级结构 真核细胞染色体的DNA念珠状三级结构 染色体的基本单位是核小体； 核小体由DNA和组蛋白构成。 组蛋白H2A，H2B，H3和H4各两分子构成组蛋白八聚体，DNA双螺旋分子缠绕其上1.75圈（146bp）核小体的核心颗粒。 核小体的核心颗粒之间由DNA和组蛋白H1连接 三、RNA分子的结构 1、tRNA的结构 tRNA的三叶草型二级结构 环：8-12个核苷酸 臂：3-4bp tRNA的三级结构——倒L型 2、mRNA的结构 3、rRNA 第四节 核酸的性质 二、核酸的紫外吸收 三、核酸的变性、复性及杂交 2、变性重要特征——判断变性的标志 3、DNA的热变性 影响Tm值的因素 : 4、复性 核酸的复性 5、核酸的分子杂交(hybridization) 探针（probe） 具有特异顺序的单链DNA或RNA分子，用放射性同位素或免疫方法进行标记后,可以用杂交方法测定样品中与其互补的顺序。 杂交方式 a）直接用probe与菌落组织细胞中的核酸杂交，未改变核酸位置——原位杂交技术。 b）将核酸直接粘在膜上，再与探针杂交——狭缝印迹杂交。 硝酸纤维素膜作支持物进行的杂交。 Southern印迹（Southern biotting） DNA经酶解和电泳分离后，将其片段→硝酸纤维素滤膜或尼龙膜，用同位素标记的DNA（或RNN）探针与之杂交，通过放射自显影，以探测目的片段的存在及片段长度。 其它杂交技术 1）? 将RNA变性后转移到纤维素膜上再进行杂交——Northern印迹法。Northern blotting 2）? 抗原抗体结合分析蛋白质——Western印迹法（biotting） 分子杂交的运用：测定基因拷贝数