实验七 鸡基因组的PCR-RFLP分析188.pptVIP

三、实验目的 通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳技术、DNA的分离鉴定及基因型判定方法。 * fhfh 四、实验材料、仪器和试剂 材料：DNA样品 仪器：电泳液、水平凝胶电泳槽、移液器、紫外透射仪、Tip头 试剂 电泳缓冲液(1×TAE)：0.04mol/L三羟甲基氨基甲烷-乙酸(tris-乙酸)，0.01mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA) 溴化乙锭(EB10mg/ml)：100ml灭菌双蒸水中加入1g EB 1%琼脂糖：100ml 1×TAE加入1g琼脂糖 上样缓冲液(溴酚蓝-甘油溶液)：先配制1%的溴酚蓝水溶液与等体积的甘油即可 * fhfh gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; 实验七 鸡基因组的PCR-RFLP分析 动物遗传学实验 * fhfh 一、实验方法 1、鸡基因组DNA的提取 2、目的基因的PCR扩增 3、内切酶消化PCR产物 4、琼脂糖凝胶电泳（检测基因型） * fhfh 鸡DNA的获取 1、鸡翅下静脉采集全血；2%EDTA抗凝； 2、DNA提取： 裂解细胞核（红细胞+白细胞） 酚-氯仿去除蛋白质 酶解RNA 获取DNA * fhfh PCR扩增 1、引物设计（Genbank）； 2、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR） * fhfh PCR反应体系 DNA模板 dNTP Taq DNA聚合酶 引物 Mg2+ 缓冲液 * fhfh PCR反应程序 预变性 94℃ 3~5min 35循环： 变性 94 ℃ 30s~1min 退火 50~65 ℃ 30~60s 延伸 72 ℃ 1~2min 后延伸 72 ℃ 5~10min * fhfh PCR产物电泳检测结果 * fhfh PCR产物+缓冲液+内切酶 5‘-TCATGA-3’ 3’-AGTACT-5’ 内切酶消化PCR产物 * fhfh A B 电泳图谱 AA BB AB 电泳检测基因（1） * fhfh 电泳检测基因（2） * fhfh 实际操作环节 琼脂糖凝胶电泳检测基因型 * fhfh 二、实验原理 电荷效应：DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。 分子筛效应：与分子大小及构象有关，由于DNA分子或DNA片段的分子量差别，电泳后呈现迁移位置的差异。 条带类型对应于基因型。 * fhfh gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk; gjhhj jklk;