‘新高’梨小孢子发生及其形态变化研究.docVIP

‘新高’梨小孢子发生及其形态变化研究 　　摘要： 【目的】为了观察‘新高’梨花粉母细胞减数分裂及花粉发育过程，探讨‘新高’梨花粉败育的细胞学基础，【方法】以雄性不育的‘新高’和可育的‘丰水’梨为试材，采用常规压片法观察花粉母细胞减数分裂和花粉发育过程。【结果】结果表明，‘新高’梨花粉母细胞减数分裂过程中，染色体能正常配对形成二价体，经过2次分裂后产生四分体，随后释放出小孢子。然而在小孢子发育早期，小孢子发育缓慢；在中期，细胞质收缩，细胞壁加厚不明显，出现小孢子粘连；到小孢子发育晚期，大量小孢子出现粘连降解，或小孢子细胞壁破损，细胞质、细胞核降解消失。【结论】‘新高’梨花粉母细胞的减数分裂正常，其花粉败育发生在小孢子中出现液泡到单核晚期。 　　关键词：‘新高’梨； 花粉败育； 减数分裂； 细胞学 　　中图分类号：S661.2 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2012？雪06-1027-04 　　杂种优势的利用在提高农作物产量及抗病、抗逆性等方面发挥了重要作用。雄性不育系的应用大大地简化了杂交育种程序，同时也是生产一代杂种最经济、有效的途径。由于雄性不育系在蔬菜、农作物的杂交育种和制种等方面的实用性更强，以及拟南芥等模式植物研究的方便性，所以众多学者不仅在上述植物中努力寻找、挖掘和创造新的雄性不育资源，而且对其不育性从遗传学、细胞学、解剖学、生理生化和分子生物学等方面进行了研究[1-2]。在他们的研究中发现雄性不育系花粉败育时期和方式多样，从造孢细胞到二核花粉的各个时期都可发生，同一品系败育特征既可出现在一个时期，也可出现在相邻两个时期或多个时期。梨作为木本植物，其雄性不育资源没有像蔬菜等农作物在育种和制种方面的实用性，但梨的大多品种自花不结实，雄性不育不能为其他品种提供有效的授粉，这将极大地限制这种品种在生产中的选择与推广，因此梨雄性不育机理的研究也受到重视[3-4]。但纵观前人的研究，主要集中于雄性不育系本身的性状、花药组织结构及生理差异的比较[5-7]，而关于梨花粉败育时期及方式的系统研究国内外还未见报道。我们以‘新高’梨为试验???料，研究花粉母细胞减数分裂、小孢子发生及其败育过程中的细胞形态特征，为进一步研究其败育机理提供理论基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　试验以南京溧水新世纪园艺研究所梨品种园内长势一致、花量基本相同的6 a生‘新高’和‘丰水’梨为试材。从3月初开始，结合花药涂片和45%的醋酸洋红染色镜检，确定花粉发育的时期，分别在花粉母细胞、四分体、单核花粉期、单核花粉晚期、二核花粉期等发育时期收集花药，除一部分直接用作游离小孢子的压片观察外，固定于卡诺氏固定液（3倍乙醇∶1倍冰醋酸）中，最长不超过24 h，然后转移到70%酒精中，放在4 ℃冰箱保存备用。 　　1.2 方法 　　制片用常规压片法观察花粉母细胞减数分裂和雄配子体的发育，染色液分别为石炭酸品红和醋酸洋红[8]。Olympus-BX50型显微镜下观察并拍照。 　　2 结果与分析 　　2.1 ‘新高’梨花粉母细胞减数分裂行为的观察 　　‘新高’梨花粉母细胞发育进入减数分裂前期I之前，细胞体积和细胞核显著地增大，由于DNA已复制，核的染色逐步加深（图版Ⅰ-A）。当进入细线期时，细胞核明显可见（图版Ⅰ-B）。在偶线期，经过同源染色体的配对，缠绕成一团的染色质线逐渐松散（图版Ⅰ-C）。当丝状的染色体逐渐缩短变粗时，非姊妹染色单体间发生了交换，此时已进入粗线期（图版Ⅰ-D）。终变期时，配对的染色体缩短到最小程度，可以看出17个二价体（图版Ⅰ-E）。进入中期I后，花粉母细胞里所有二价体均整齐而集中地排列在赤道板上（图版Ⅰ-F），发现极少的花粉母细胞里有个别染色体散落在赤道板之外（图版Ⅰ-G），细胞质里出现纺锤体。此后，同源染色体分离，染色体减半，花粉母细胞染色体均衡地分成两组并分别向两极移动。未发现花粉母细胞染色体出现分离落后的现象，以及染色体分离不同步的特点。进入减数分裂第一次分裂的后期（图版Ⅰ-H）。染色体移至两极后开始消失，松开变细，核膜重新出现，进入末期Ⅰ（图版Ⅰ-I）。与此同时，形成细胞板，将细胞分隔为二，形成二分体（图版-J）。第一次减数分裂后，细胞质并不分裂，而很快进入第二次分裂。中期Ⅱ：染色体各自排列在赤道板上，细胞之间有分裂不同步的现象（图版Ⅰ-K）。后期Ⅱ、末期Ⅱ：染色单体间顺利分离并移向两极（图版Ⅰ-L，M），细胞质分裂形成四分体（图版Ⅰ-N，O），随后释放小孢子（图版-P）。从减数分裂全过程来看， 除发现极个别的花粉母细胞在减数分裂中期I染色体落后外，未发现‘新高’花粉母细胞减数分裂的其他异常现象。‘新高’梨花粉母细胞的同源染色体能正常联会配对，并能正常分离，未发现小核的形成，细胞质也能正常分离形成四分体，