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副猪嗜血杆菌病防治技术研究 　　摘要：副猪嗜血杆菌病是流行于猪群的接触性呼吸道传染病，该病可以影响养猪生产的各个阶段，临床上以猪的纤维素性多发性浆膜炎、心包炎、关节炎、脑膜炎为特征。对副猪嗜血杆菌病的临床研究应该包括菌株的分离鉴定、血清和基因分型、药物和疫苗的防治研究等。 　　关键词：副猪嗜血杆菌病；菌株分离鉴定；分型；免疫及防治 　　中图分类号：Ｓ８２８ 文献标识码：Ｂ 文章编号：0439－８114（２０12）24－5730-04 　　副猪嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｐａｒａｓｕｉｓ，ＨＰＳ）是正常猪群呼吸道上的一种常在菌。临床上以猪的纤维素性多发性浆膜炎、关节炎、心包炎、脑膜炎为特征，该病又被称为革拉泽氏病［１］。该病目前在规模化养殖场感染率很高，且危害严重，主要引起哺乳仔猪、保育猪（３０～５０日龄）的关节肿胀、喘气、进行性消瘦、生长速度???缓、急性或慢性死亡等。副猪嗜血杆菌病的临床发病率一般在１０％～１５％，严重时病死率可达５０％，给养猪生产造成严重经济损失。不同血清型菌株之间存在毒力差异。国外特别是养猪发达国家对副猪嗜血杆菌做了流行病学调查，临床发病猪中分离率高达２０％，且流行的血清型多为副猪嗜血杆菌中毒力较强的４、５、１３型等。蔡旭旺等［２］首次鉴定了副猪嗜血杆菌分离菌株的血清型，进而建立了快速分离鉴定、培养和保存该菌的方法，并筛选出ＴＳＡ（胰蛋白大豆琼脂）固体培养基和ＴＳＢ液体培养基作为最适合该菌的培养基。同时对２００４年１２月以前分离鉴定的２８１株副猪嗜血杆菌进行了血清分型，表明中国目前流行的菌株是血清４型（２４．２％）和５型（１９．２％），其次是１３型（１２．５％）、１４型（７．１％）和１２型（６．８％），另有１２．１％的分离菌株不能进行血清学分型。 　　副猪嗜血杆菌病是造成猪场保育猪死亡的主要原因，在特定条件下如断奶、气候应激等因素才可侵入机体并引起严重的全身性疾病。近年来，由于免疫抑制性疾病如蓝耳病（ＰＲＲＳ）、圆环病毒２型（PCV-2）等的存在和持续性感染加剧了副猪嗜血杆菌的感染程度。 　　１ 病原学 　　１９１０年，Ｇｌａｓｓｅｒ首次报道了一种革兰氏阴性短小杆菌与猪的纤维素性浆膜炎和多发性关节炎之间的联系。１９２２年，Ｓｃｈｅｒｍｅｒ和Ｅｈｒｌｉｃｈ首次分离出了这种微生物，其分离培养困难。在显微镜下观察，副猪嗜血杆菌短小、无运动、多种形态，从单个的球杆菌到长的、细长的以至丝状的菌体。通常可见荚膜，但体外培养时不受影响。该菌生长只需要Ｖ因子或ＮＡＤ（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸），不需要Ｘ因子，属巴斯德菌科。在鲜血琼脂平板与葡萄球菌共划线培养时，呈现典型的“卫星现象”，即越靠近葡萄球菌其生长越好，远离葡萄球菌的地方不生长，并且在鲜血琼脂平板上的副猪嗜血杆菌菌落周围不出现溶血现象。 　　ＨＰＳ具有荚膜多糖抗原和菌体结构抗原。荚膜多糖抗原成分主要是多糖和磷酸壁，具有型特异性；菌体结构抗原包括外膜蛋白（ＯＭＰ）和脂多糖（ＬＰＳ）。ＨＰＳ已知的毒力因子及潜在的毒力因子主要有荚膜、菌毛、外膜蛋白、ＬＰＳ、转铁蛋白、神经氨酸酶等。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术可把副猪嗜血杆菌的ＯＭＰ分为两个完全不同的生物型，即生物１型和生物２型。李静怡等［３］在ＨＰＳ中发现了２个与流感嗜血杆菌具有同源性的外膜蛋白Ｐ２和Ｐ５，该蛋白与细菌黏附有关，在毒力株和非毒力株中Ｐ２的分子质量分别为４８　ｋu和５５　ｋu，因此可通过Ｐ２蛋白来区分毒力株和非毒力株。ＨＰＳ的ＯＭＰ具有较好的免疫原性，Ｍｉｎｉａｔｓ等研究发现，用含有ＯＭＰ和ＬＰＳ抗原的菌苗免疫动物，有ＯＭＰ抗体的猪才能抵抗强毒菌株的感染。副猪嗜血杆菌的ＬＰＳ具有与其他革兰氏阴性菌内毒素相似的活性，而ＬＰＳ可诱导ＰＣＶ-２在体外培养的猪肺泡巨噬细胞中的复制，增加ＰＣＶ-２在细胞核内的抗原和核酸信号［４］。 　　Ｙｕｅ等［５］以国内分离的优势血清５型菌株ＳＨ０１６５为亲本株完成了全基因组测序，分析鉴定出了２个潜在区分强弱毒力菌株的分子靶标——ＯＭＰ２和ｓｏｄＡ基因。利用８株已测序完成的菌株全基因组序列，总结出１８个主要的毒力相关基因或操纵子基因。全基因组分析结果表明，ＳＨ０１６５菌株的基因组由２　２６９　１５６个核苷酸组成一个环状染色体，Ｇ＋Ｃ含量高达３９．９９％，编码２　２９９个基因。基因组同源性方面，副猪嗜血杆菌与胸膜肺炎放线杆菌遗传进化上最接近，分类上独立于嗜血杆菌属外形成一个相对独特的进化分支。 　　１．１ 血清型分型法 　　基于免疫扩散试验的１５种血清型已被确定。型特异性抗原为对热稳定的多糖，据推测，其可能是荚膜或脂多糖（ＬＰＳ）。副猪嗜血杆菌流行存在明显地域差异，在日本、德国、澳大利亚、美国、加拿大、西班牙和丹麦分离的血清型中显示，血清型４、５和１３最为常见