抗核抗体复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性关联.docVIP

抗核抗体复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性关联 　　[摘要] 目的 探讨抗核抗体（ANA）复筛查试验阴性与特异性抗体确认试验阳性的关联。 方法 对2065例间接免疫荧光法（IIF）检测阴性结果的样本进行免疫印迹法（LIA）检测，并使用ELISA进行辅助检测。观察IIF阴性结果下LIA、ELISA检测结果，并对样本稀释度对结果的影响进行深入研究。 结果 165例IIF阴性样本经LIA确认为阳性，其中以SS-A最多，达到29.76%。通过ELISA检测SS-A，发现与LIA符合率达到88.0%；而通过降低样本稀释度，可以发现50%的样本是因为特异性抗体的浓度较低才漏检的。 结论 对于高度怀疑为AID的患者，不管IIF检测是否为阳性，都应该进行LIA的复检，以提高检测的准确性。 　　[关键词] 抗核抗体；特异性抗体；间接免疫荧光法；免疫印迹法 　　[中图分类号] R446.6 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）20-0070-03 　　抗核抗体（ANA）检测是目前临床上诊断自身免疫性疾病（AID）最重要、可靠的一种实验室诊断手段，其中间接免疫荧光法（IIF）的使用最为广泛[1，2]。随着实验技术的进一步发展，目前其他针对特异性抗体（ANAs）的新型检查手段也不断出现，如ELISA、免疫扩散及免疫印迹等[3，4]。临床工作中，IIF常常作为初步检测存在，对检测结果呈现阳性的样本进行特异性抗体确认试验[5]。但临床工作中发现，有时IIF与特异性抗体确认试验结果差异较大。我科对2 065份IIF检测阴性样本进行免疫印迹法（LIA）检查，共发现15种特异性抗体。本研究试图阐述IIF阴性样本与LIA检查的关系与意义，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　本研究共纳入受试者2 065例，均为我院2010年1月～2012年12月各科室申请ANA检测的患者，ANA检测均采用IIF，检测结果均为阴性。其中男972例，女1 093例，年龄37～69岁，平均（52.1±13.3）岁。患者均为清晨空腹抽取肘静脉血液5 mL，血液经离心机离心5 min，转速3 000 r/min，分离出血清。 　　1.2 IIF检测 　　IIF检测试剂盒购自德国欧蒙公司，将分离出的血清稀释，并使其与抗原基质片反应，时间为30 min（同时设阳性和阴性对照），浸泡5 min，然后加入荧光标记的二抗，避光孵育30 min，浸泡5 min。最后用甘油封片，在荧光显微镜下观察并记录结果，阳性结果为抗体滴度≥1∶100。 　　1.3 LIA检测 　　LIA检测试剂购自德国欧蒙公司，特异性抗体检测包括抗nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、着丝点蛋白B（CENP B）、增殖细胞核抗原（PCNA）、双链DNA（dsDNA）、核小体（Nucleosome）、组蛋白（Histone）、核糖体（rRNP）以及线粒体-M2（AMA-M2）等15种。在第一次温育时，将已经1∶100稀释的血清样本2 mL与膜条上的靶抗原反应，等待30 min后洗涤3次，共计15 min。之后加入抗人IgG（酶结合物，已经酶标记）1.5 mL反应，等待30 min后洗涤3次，共计15 min。最终加入底物液反应15 min，并用蒸馏水洗涤膜条，肉眼观察反应结果。 　　1.4 ELISA定性检测抗SS-A 　　试剂盒购自德国欧蒙公司，以20 RU/mL的吸光度（A）值为定性分析临界值。标本1∶200稀释，450 nm波长比色。 　　1.5 正常对照组 　　选取20份经IIF、LIA检测均为阴性的血清样本作为对照，稀释度分别为1∶10、1∶32。 　　1.6 统计学方法 　　应用SPSS 14.0软件，计数资料采用χ2检验，P 　　本研究发现，2 065例IIF检测ANA阴性样本，经过LIA检测后165例为阳性结果。经过分析，我们发现，50例为SS-A的漏诊，漏诊比例明显大于其他特异性抗体。因此，我们将SS-A作为代表进行了进一步研究。首先，我们采用ELISA对50例样本进行ANA检查。结果发现，ELISA检查下44例为阳性结果，阳性率为88.0%。说明LIA与ELISA在检测特异性抗体方面，具有较高的符合率。因此，我们将样本的稀释度改变并进行了IIF的重新检测，结果发现在1∶10时，ANA阳性为17例，1∶32时，ANA阳性为8例，而1∶10时ANA阴性为25例。对照组中，1∶10时，ANA均为阴性。结果提示，50%的样本是因为特异性抗体的浓度较低才漏检的。 　　综上所述，IIF检测自身抗体能够出现15种类型特异性自身抗体的漏检，而其中以SS-A漏检率最为严重（29.7