提高Lipofectamine2000对PC12细胞转染效率研究.docVIP

提高Lipofectamine2000对PC12细胞转染效率研究 　　[摘要] 目的 探讨提高PC12细胞转染效率的方法。 方法 细胞培养板用10 μg/mLⅠ型牛胶原蛋白包被，通过在转染过程中加入9 μmol/L趋溶酶体试剂氯喹及8 μmol/L聚胺类试剂亚精胺，同时调整Lipofectamine2000与DNA用量的比例和转染时间。考察DNA与Lipofectamine2000的比例对PC12细胞转染效率的影响，转染时间对PC12细胞转染效率的影响，氯喹、亚精胺用量对PC12细胞转染效率的影响，氯喹、亚精胺对PC12细胞活性的影响，氯喹、亚精胺对PC12细胞神经轴突生长的影响及与4种常用脂质体转染试剂对PC12细胞转染效率的比较。结果 ①对PC12细胞转染，DNA∶Lipofectamine2000用量比例应控制在1∶4。②当转染时间分别为1、2、4、8、24 h时，PC12细胞转染率分别为35.5%、37.9%、40.5%、40.3%及38.6%，4 h达到最大转染效率。③氯喹、亚精胺加入浓度的增加，PC12细胞转染效率随之增加，当氯喹、亚精胺加入终浓度分别增至9 μmol/L和8 μmol/L时，PC12细胞的转染效率最高，转染效率为40.5%。④加入终浓度为9 μmol/L氯喹与8 μmol/L亚精胺前、后MTT试验吸光度（590 nm）分别为（0.466±0.042）与（0.451±0.038），差异无统计学意义（P 0.05），对PC12细胞的活性无影响。⑤加入氯喹、亚精胺前、后，PC12细胞的神经轴突生长数量与长度差异无统计学意义（P 0.05）。⑥FuGENE、PolyJet、Lipofectamine LTX and Plus、Lipofectamine2000 4种脂质体转染试剂对PC12细胞转染效率分别为10.5%、8.6%、11.8%及15.3%，本法PC12细胞转染率为40.5%，差异有高度统计学意义（P 　　[关键词] PC12细胞；Lipofectamine2000；阳离子脂质体/DNA复合物；氯喹；亚精胺 　　[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）01（c）-0020-04 　　Study of enhancement of the transfection efficiency in PC12 cells transfected with Lipofectamine 2000 　　QIU Ye 　　Department of Laboratory， Nanxun Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine of Huzhou City， Zhejiang Province， Huzhou 313009， China 　　[Abstract] Objective To study the method of enhancement of the transfection efficiency of PC-12 cells. Methods Cell culture plates were coated by 10 μg/mL collagen typeⅠ， with the help of the simultaneous treatment with the lysosomotropic agent chloroquine at the concentration of 9 μmol/L combined with the polyamine spermidine at the concentration of 8 μmol/L， and adjustment of the ratio of NDA∶Lipofectamine2000 transfection reagents and the transfecting time. The influence of ratio of NDA∶Lipofectamine2000 on PC12 cell transfection efficiency， the influence of transfection time on PC12 cell transfection efficiency， the influence of chloroquine， spermine dosage on PC12 cell transfection efficiency， the influence of chloroquine， spermine on PC12 cell activity， th