猴头菇多糖脂质体包封率测定方法及其稳定性研究.docVIP

猴头菇多糖脂质体包封率测定方法及其稳定性研究 　　[摘要] 目的 对猴头菇多糖脂质体进行质量和稳定性评价，测定猴头菇多糖脂质体包封率和进行脂质体稳定性考察。 方法 采用超滤法分离脂质体与游离药物；采用紫外分光光度法，最大吸收波长为（625±1）nm，测定药物含量，计算包封率；分别在40、60、80℃下对脂质体的化学稳定性和物理稳定性进行考察。 结果 超滤法能很好的将脂质体与游离药物分离，游离药物的平均回收率为96.3%，加样回收率为95.9%，脂质体不能透过超滤膜；加速试验中40、60℃下稳定性较好。 结论 该方法可用于猴头菇多糖脂质体的质量控制。 　　[关键词] 超滤法； 猴头菇多糖； 脂质体； 包封率；稳定性 　　[中图分类号] R283.6 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（c）-0118-04 　　猴头菌Hericium erinaceus（Bull. Ex Fr.）又名刺猬菌、猴头菌、小刺猴头、猴菇、猴头蘑，是一种大型真菌，隶属于担子菌门，齿菌科[1]，据报道，猴头菌所含有的营养成分与目前人工栽培的其他食用菌相比都居前两位[2]。它富含蛋白质、各种氨基酸、维生素C、维生素B1、尼克酸、铁、锌等各种营养成份[3]。而猴头菇多糖是猴头菌的主要活性成分之一，具有免疫调节、抗肿瘤、降血脂、降血糖、防辐射等作用[4]。猴头菇多糖制成的药物和保健品深受人们喜爱，开发前景广阔。但多糖是一种不太稳定的化学物质，进入体内后，会受到各种胃肠酶的攻击而降解，失去部分药效活性，而将猴头菇多糖制成脂质体制剂，口服给药可以提高生物利用度。包封率是评价脂质体质量的重要指标，也是其发挥疗效的关键[5]。为了评价猴头菇多糖脂质体的质量，笔者建立了超滤法紫外法测定灯猴头菇多糖脂质体包封率的方法，为猴头菇多糖脂质体的质量评价提供依据。脂质体在放置过程中可能发生多种不同的变化，这些变化都会在不同程度上影响脂质体的质量，因此一个成熟的脂质体制剂必须在贮藏期间具有良好的稳定性，以保持其粒子的大小和完整性。本文用稳定性加速实验考察了猴头菇多糖脂质体的包封率、磷脂氧化指数、粒径、稳定性参数等多项指标，为其贮藏条件的选择提供了依据。 　　1 材料与仪器 ??　紫外可见分光光度仪GBC Cintra 10（澳大利亚GBC公司），Minitan小型超滤装置（日本MILLIPORE公司），旋涡混合振荡器（江苏海门其林医用仪器厂），恒温水浴锅（北京靖卫科学仪器厂）。D-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所），蒽酮（北京金龙化学试剂有限公司），浓硫酸、95%乙醇、三氯甲烷均为分析纯，猴头菇菌丝体为：5号菌株（购自福建三明真菌研究所），猴头菇多糖为本实验室自制。 　　2 方法与结果 　　2.1 猴头菇多糖的提取 　　取成熟的猴头菇菌丝体发酵液，过滤，滤液离心，得上清液于60℃下减压浓缩，过滤，滤液离心，取上清液，加入5倍体积的无水乙醇，静置过夜，沉淀抽滤，再用无水乙醇、丙酮洗涤，置干燥箱中60℃干燥，粉碎，得粗多糖。 　　2.2 猴头菇多糖脂质体的制备 　　采用乙醇滴注法制备脂质体。将磷脂、胆固醇、VE辅料溶于适量的乙醇溶液中，完全溶解后滴入60℃恒温药液中，边滴边搅拌，滴注速度越小越好，滴注结束后药液恒温搅拌10 min，旋转蒸发除去乙醇，将得到的溶液用蒸馏水定容，再保温1 h，冷却，过滤，即得。 　　2.3 实验方法 　　紫外分光光度法测定，取葡萄糖对照品制成浓度为0.5 mg/mL的对照品溶液，猴头菇多糖样品制成浓度约为30 μg/mL的溶液。对照品、样品溶液各取1 mL加入4 mL的0.1%蒽酮-硫酸溶液，摇匀，置沸水中煮沸10 min，取出迅速放冷，在黑暗中放置10 min显色，在波长625 nm下测定含量。 　　2.4 专属性实验 　　精密量取空白脂质体及含药脂质体各1 mL，加少许NaCl和三氯甲烷于10 mL容量瓶中；置50℃水浴3 min，用旋涡混合振荡器将脂质体破坏，蒽酮-硫酸法显色后用紫外分光光度法测定，结果阴性无干扰。 　　2.5 标准曲线的绘制 　　精密称取葡萄糖对照品，配成浓度为0.5 mg/mL的对照品溶液，再配制成浓度分别为0、20、40、60、80、100 μg/mL的溶液，精密吸取各个浓度对照品溶液1 mL分别置于试管中，照“2.1”项下显色方法显色，在625 nm波长处测定吸光度值，计算得回归方程：y = 0.007x - 0.0133，r = 0.999。结果表明，葡萄糖液在20～100 μg/mL与吸光度值呈良好的线性关系。根据测定结果计算标准曲线方程。本方法适用于测定浓度在20～100 μg/mL的猴头菇多糖。 　　2.6 精密度试验 　　取浓度为0.5 mg/