红细胞微柱凝胶试.ppt

红细胞微柱凝胶试验? 桓台妇幼保健医院特检科 原理 在微柱凝胶介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，利用凝胶的空间位阻，经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶低部(管底尖部)。微柱凝胶实验(又名微柱凝胶血型卡法) 比传统的玻片和试管液体介质中凝集实验更准确，更简单，结果可较长期保存。 组成与应用 微柱凝胶分中性胶、特异性胶和抗人球蛋白胶，分别用于不同的血型血清试验。在中性凝胶实验中，凝胶不含抗体，可用于检测IgM 类抗体和红细胞抗原的反应，如ABO 血剧正反定型等;在特异性凝胶试验中，凝胶中含有特异性血型抗体，可用于血型抗原检测；在抗人球蛋白凝胶试验中，凝胶中含有球蛋白抗体，可用于检测IgG 类不完全抗体和相应红细胞抗原的反应，如交叉配血、不规则抗体检定和鉴定，以及用于人血清抗D 血型筛查等。 试剂 1. 中性凝胶微柱卡　不含任何抗体。，应用于IgG 类不完全抗体检测。注意向反应腔内要先加红细胞，后加血清或抗体。 2. 特异性凝胶微柱卡　含特异性抗体，如抗A 、抗B 、抗D 。 3. 抗人球蛋白凝胶微柱卡　含有抗人球蛋白(抗IgG +C3) 结果判断 红细胞抗原抗体在凝胶介质中反应，未凝集的红细胞通过离心后沉降于管底，为阴性反应。红细胞抗原与相应的不完全抗体结合后(致敏红细胞)，凝胶中的抗人球蛋白形成凝集块，离心后仍滞留在胶上或胶中，为阳性反应。 凝股微管抗人球蛋白试验，可省去传统的抗人球蛋白试验的复杂洗涤红细胞过程，使试验更简单、更规 应用与操作（一） 1.血型检测 ( 1 )将被检者红细胞(不用洗涤)配成2%－3% 生理盐水悬液向己标记好的微管反应腔内加50μl。 (2) 再加已知抗体(IgG 抗D 或抗C ，抗E 等)50μl 于被检者红细胞上。 (3) 立即水平离心1 000 r/min , 10 min 观察结果。 应用与操作（二） 2. 交叉配血试验 (1)取凝胶抗人球蛋白微柱卡，标记1 号(主侧) ，2 号( 次侧 )。 (2 )将献血者红细胞(不用洗涤)配成0.8% －1. 2% 生理盐水悬液50μl 轻轻滴入l 号微管中，再加25μl 受血者血清。 (3 )将受血者红细胞(不用洗涤)配成0.8% －1. 2% 生理盐水悬液50μl 轻轻滴入2 号微管中，再加25μl 献血者血清。 (4) 将1 号、2 号已加好反应物的凝肢卡放入37 度孵育15 min。 (5) 取出凝胶卡立即用水平离心1 000 r/min(80 －100 g) 10 min 后，观察结果。 应用与操作（三） . 不完全抗体筛检和鉴定 (1)将筛检红细胞或红细胞谱细胞(0.8%－1.2% 红细胞生理盐水悬液)分别加入标记好的微管反应腔中各50μl。 (2) 然后分别立即加入被检血清25μl。 (3 )将己加好反应物的凝胶卡放入37 度孵育15 min。 (4) 取出凝胶卡立即用水平离心1 000 r/min　10 min 后，观察结果。 结果 1.若对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中判读为阳性。 2. 若对照管和检测管的细胞沉淀均在管底判读为阴性。 3. 若对照管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验。 附注 1.每种微柱凝胶卡部分为反应腔和凝胶分离柱两部分，操作时，向反应腔内要先加红细胞，后加血清或抗体。 2. 离心机选择　一般使用微性凝胶卡专用水平离心机。因为水平转子离心机离心力和凝胶微柱中红细胞离心力是同一方向(同轴线)，这样阳性结果的红细胞抗原抗体凝集复合物不偏向凝胶表面一侧和胶中一侧; 阴性结果的红细胞不偏向管底之一侧而是沉淀于凝胶微柱管尖底部。而角离心机由于其离心力和凝胶微柱中红细胞离心力轴向不一致，可能造成凝集复合物偏向管一侧，特是阴性结果位于管底之一侧，而不是管底尖部，易造成弱阳性假象。 * * *