酶工程考试总结.docVIP

酶工程酶的生产、改性与应用的技术过程称为酶工程 酶是具有生物催化功能 生物大分子 优点：具有专一性、催化效率高和作用条件温和等显著特点。 ②转移酶 AB+C=A+BC ③水解酶 AB+H2O=AOH+BH ④裂合酶 AB=A+B ⑤异构酶 A=B ⑥合成酶/连接酶 A+B+ATP=AB+ADP+Pi 评价固定化酶的指标 固定化酶的比活：每（克）干固定化酶所具有的酶活力单位。 酶的结合效率：又称酶的固定化率，是指酶与载体结合的百分率。 未结合的酶活力，包括固定化后滤出固定化酶后的滤液以及洗涤固定化酶的洗涤液中所含的酶活力的总和。 酶活力回收率是指：固定化酶的总活力与用于固定化的总酶活力的百分率。 相对酶活力：具有相同酶蛋白量的固定化酶活力与游离酶活力的比值。 酶活力:又称为酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。通常以在一定条件下酶所催化的化学反应(初)速度来表示。 酶活力单位U ：是衡量酶活力大小的计量单位,又称酶单位，规定条件（最适条件）下一定时间内催化完成一定化 学反应量所需的酶量。 ①国际单位IU：1961年，在最适条件下每分钟转化1μmol底物所需要的酶量为一个酶活力单位。即1IU= 1μmol/min ②国际单位Kat：1972年，指在最适条件下1秒钟内转化1mol底物所需的酶量。即 1 Kat=1mol/s Kat和IU的换算关系：1 Kat=6×107 IU 酶的比活力（比活性）：每单位（一般是mg）蛋白质中的酶活力单位数（酶单位/mg蛋白）。 比酶活： 9. 在评价纯化酶的操作方法是优劣时，要同时考虑两个概念： 纯化倍数与回收率 纯化倍数=某纯化操作后的比活力/第一步操作后的比活力 回收率=某纯化操作后的总活力/第一步操作后的总活力 总活力＝单位体积的酶活力(U/ml)×分离溶液总体积(ml) 10. 提高酶产量的措施 1、添加诱导物 诱导物一般可以分为3类 原理：对于诱导酶的发酵生产，在发酵过程中的某个适宜的时机，添加适宜的诱导物，可以显著提高酶的产量。 ①酶的作用底物 许多诱导酶都可以由其作用底物诱导产生。 ②酶的催化反应产物 有些酶可以由其催化产物诱导产生。 ③作用底物的类似物 一些可以与酶结合但不能被酶催化的底物类似物。 2、控制阻遏物的浓度 阻遏作用根据机理不同，可分为：产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。 原理：①产物阻遏作用是由酶催化作用的产物或者代谢途径的末端产物引起的阻遏作用。 ②分解代谢物阻遏作用是由分解代谢物（葡萄糖等和其它容易利用的碳源等物质经过分解代谢而产生的 物质）引起的阻遏作用。 方法：控制阻遏物的浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施。 为了减少或者解除分解代谢物阻遏作用，应当控制培养基中葡萄糖等容易利用的碳源的浓度。 采用其他较难利用的碳源，如淀粉等；采用补料、分次流加碳源；添加一定量的环腺苷酸（cAMP）。 对于受代谢途径末端产物阻遏的酶，可以通过控制末端产物的浓度的方法使阻遏解除。 3、添加表面活性剂 原理：表面活性剂可以与细胞膜相互作用，增加细胞的透过性，有利于胞外酶的分泌，从而提高酶的产量。 方法：将适量的非离子型表面活性剂，如吐温（Tween）、特里顿(Triton)等添加到培养基中，可以加速胞外酶的 分泌，而使酶的产量增加。 4、添加产酶促进剂 原理：产酶促进剂是指可以促进产酶、但是作用机理未阐明清楚的物质。现在还没有规律可循，要通过试验确 定所添加的产酶促进剂的种类和浓度。 11. 细胞破碎 ①机械破碎（捣碎法、研磨法、匀浆法） 原理：通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。 ②物理破碎（温度差破碎法、压力差破碎法、超声波破碎法） 原理：通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎。 超声波破碎发：利用超声波发生器所发出的声波或超声波的作用，使细胞膜产生空穴作用而使细胞破碎的方法。 原理：空穴泡由于受到超声波的迅速冲击而闭合，从而产生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性旋涡在 介质中的悬浮细胞上造成了剪切应力，促使细