生物学导论实验一光学显微镜的构及使用方法.ppt

光学显微镜的成像原理 显微镜的重要光学技术参数 分辨率、放大率、镜口率、焦点深度和视场宽度等反映了显微镜的性能和质量 倒置显微镜 实验一 普通光学显微镜的结构及使用 一、目的要求 熟悉普通光学显微镜的构造和性能 掌握显微镜的使用方法 了解光学显微镜的维护方法 二、实验原理 显微镜可将微小物体放大 物镜和目镜的作用相当于一个凸透镜 标本放在物镜下方1～2倍焦距之间，在 明视距离为25cm，见到放大的清晰物象 数值孔径（镜口率）numerical aperture,N.A N.A是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率（n）和镜口角（α）半数的正玄之乘积，即N.A＝n· sin α/2 镜口角α是物镜光轴上的物体点与物镜前透镜的有效直径所形成的角度。 镜口角越大，进入物镜的光通亮就越大，它与物镜的有效直径成正比，与焦点的距离成反比 －－－－－ 1/2α objective sample 间质折射率（n） 空气为 1 水为 1.33 油为 1.5 物镜N.A值 ·空气为0.05~0.95 ·水为0.1~1.20 ·油为0.83~1.40 分辨率（R） 显微镜或人眼在25cm的明视距离处，能清楚地分辨被检物体细微结构最小间隔的能力 人眼分辨率约为100um，光镜为0.2um 计算公式 0.61λ N.A R = = 0.61λ N· sinα/2 = 0.61×0.5 1.50×1.0 = 0.2um （光镜最大分辨率） 注： λ——光波波长（白光为0.5） N——介质折射率 α——镜口角 放大率（放大倍数） 放大倍数＝目镜放大倍数×物镜放大倍数 最小倍数＝5 × 4＝20 最大倍数15 × 100＝1500 放大倍数的表示用×，如10 ×,100 × ，… 焦点深度（焦深） 在使用显微镜时，当焦点对准某一物体时，不仅位于该点平面上的各点都可以看清楚，而且在此平面的上下一定厚度内，也能看得清楚，这个清楚部分的厚度就是焦深。 焦深大, 可以看到被检物体的全层，而焦深小，则只能看到被检物体的一薄层 在数值孔径0.95时约为非常浅的0.2μ 视场宽度 在显微镜下看到的圆形视场内所能容纳被检物体的实际范围。视场宽度愈大，愈便于观察。 视场的大小，是由目镜里的视场光阑决定的。 视场宽度与物镜的放大倍数成反比 因此，低倍镜看整体，高倍镜看局部 三、内容与方法 （一）显微镜的构造及功能 1.机械部分 镜筒（tube） 物镜转换器（revolving nose-piece ） 镜臂（arm） 调焦器（focusing adjustment） coarse focus and fine focus 载物台（stage） 镜柱（post） 镜座（base） 2.光学系统部分 目镜（ocular） 5×，10 × ，15 × 物镜（objective）4×,10×,40×,100× 聚光器（condenser） 光源及光阑 标准物镜的性质 放大倍数 数值孔径 工作距离*（mm） 10× 0.20 6.5 20× 0.50 2.0 40× 0.65 0.6 100× 1.25 0.2 *工作距离：物镜最下端与盖玻片上表面之间的距离。 （二）显微镜的使用方法 1.低倍镜的使用 调光 先检查光强度开关的位置，放到最小，再通电，亮度适中，物镜对准通光孔，光阑，光栅，聚光器等 放片 标本朝上，勿放反了 调焦 先粗调，后细调；调过头了，反方向调回来；记住方向，慢调！ 2.高倍镜的使用 先在低倍镜下找到标本，并将要观察的部位移至视野中央 转换高倍镜头 慢慢调节细调，同时观察，调到最清晰为止 油镜使用是在高倍镜的基础上进行的，转开高倍镜，滴上香柏油后，转换油镜头 使用油镜后要用清洁剂清洗镜头和标本 3.油镜的使用 油镜使用是在高倍镜的基础上进行的，转动目镜转换器，至高倍镜与油镜头之间 滴上香柏油后，转换油镜头 慢慢调节细调，调到所观察的标本为最清晰为止 注意事项：增强光线；在高倍镜下把要观察的部分移到视野中央；镜头用油浸泡；用完用清洁剂清洗干净镜头和标本。 （三）标本观察 ①头发丝交叉 ②文字 ③蛙血涂片 四、作业 记录实验一结果，完成作业一 记录高倍镜下视野中央的头发交叉点转换成低倍镜后所在的位置