生物化5年制第三章酶.ppt

胰凝乳蛋白酶原的激活 (二). 变构酶 1. 变构效应与变构酶 一些代谢物可与酶的非活性中心可逆地结合，引酶分子变构，导致酶催化活性的改变，称为酶的变构效应，或变构调节。 具有变构效应的酶称为变构酶(allosteric enzyme)。 引起酶变构效应的物质称为变构效应剂。 2. 特点 3. 生理意义 在代谢途径中，底物激活与产物抑制的主要作用机理 变构酶均是多亚基蛋白 具有活性中心和别构中心(不一定在同一亚基上) 具有协同效应 研究前提: 单底物、单产物反应 酶促反应速度在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量或产物的生成量来表示 反应速度取其初速度(底物的消耗量5%) [S][E]  一 、底物浓度对反应速度的影响 (effect of substrate concentration) [S]对V的影响 (一)、米-曼氏方程(Michaelis-Menten equation) 1. 中间产物学说 2. 底物浓度对反应速度的影响 [ S ]很低时，V ∝ [ S ] 随[ S ]的增加，V增加逐渐减少 当[ S ]增加到一定时, V不再增加 酶促反应的速度与底物浓度的关系符合米氏方程 Vmax ：最大反应速度， Km ：米氏常数 3. 底物浓度与反应速度的关系 V= Vmax [ S ] Km + [ S ] (二)、 Km 与Vmax的意义 1. Km 是反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度 2. Km 可间接反应底物与酶的亲和力(二者呈反比) 3. Km 是酶的特征常数之一，与酶浓度无关 4. 同一酶对于不同底物有不同的Km值 Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与 酶浓度成正比 如果酶的总浓度已知，可从Ｖmax计算 酶的转换数(k3) 酶的转换数（turnover number） 定义：当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。 意义：可用来比较每单位酶的催化能力 (三)、 Km 与Vmax的测定 通过测定不同[ S ]下，其酶促反应初速度的值，得到的每组数据直接作图后不易测定Km 与Vmax值。 将米氏方程进行变幻后，可将曲线方程转化为直线方程，更容易地测定Km 与Vmax值。 1. 双倒数作图法(林-贝氏作图法) 将米氏方程两边同时 取倒数，分别以1/[S] 和1/V为横轴(X)和纵 轴(Y)。 Y0=1/ Vmax X0=-1/Km 2. Hanks作图法 将双倒数后的方程再 两边同时乘以[ S ]即得， 以[S]为横轴(X)，而以 [S]/V为纵轴(Y)。 Y0= Km/Vmax X0=-Km 二 、酶浓度对反应速度的影响 (effect of enzyme concentration) 当底物浓度远大于酶浓度时，反应速度与酶浓度成正比关系。 三 、温度对反应速度的影响 (effect of temperature) 1. 温度对酶促反应速度具有双重影响 温度升高，可使底物分子和酶分子平均动能增加，活化分子数相应增多，从而使反应速度增加。 温度超过一定范围后，酶分子会出现变性，酶催化活力下降，从而使反应速度降低。 温度降低使酶促反应降低，但一般不破坏酶构象。 2. 最适温度(optimum temperature) 使酶促反应速度最快时的环境温度称为最适温度。 酶的最适温度不是酶的特征常数，与反应时间有关。 四 、pH对反应速度的影响 (effect of pH) 1. pH对酶催化活性影响 不同的pH条件下，酶及其辅因子的解离状态不同，影响酶与底物的结合 2. 最适pH(optimum pH) 使酶催化活性达到最大的环境pH称为酶促反应的最适pH 。 体内绝大多数酶的最适pH接近中性(≈7) 。 最适pH也不是酶的特征常数 五 、抑制剂对反应速度的影响 (effect of inhibitor) (一). 不可逆性抑制作用(irreversible inhibition) 能使酶催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称为酶的抑制剂(inhibitor) 有可逆抑制和不可逆抑制两种类型 1. 抑制剂与酶以共价键结合，不能以物理方法解除 专一抑制剂：如有机磷化合物与羟基酶的羟基形成酯键 非专一抑制剂：重金属离子(Hg2+、Ag+等)或As3+ 可与酶分子的SH结合，使酶失活 2.