维A酸、胡萝卜素、牛磺酸对大鼠实验性阻塞性肺气肿的预防作用及机制探讨.ppt

维A酸、?-胡萝卜素、牛磺酸对大鼠实验性  阻塞性肺气肿的预防作用及机制探讨 材料与方法 大鼠实验性阻塞性肺气肿模型的复制与分组 选用Wistar雄性大鼠，体重230-300g，（购于首都医科大学动物中心，动物编号100148，合格证号医动字01-3048）。实验分5组，正常对照组15只；单纯吸烟组15只，用于制备阻塞性肺气肿模型；维A酸组12只；?-胡萝卜素组12只；牛磺酸组12只。 香烟：金键牌香烟，焦油含量18mg/支，烟碱量1.2mg/支。 给药方法 维A酸组：每天吸烟染毒前通过胃管给大鼠灌胃维A酸15mg/kg，共75天； ?-胡萝卜素组：每天吸烟染毒前给大鼠灌胃?-胡萝卜素15mg/kg，共75天； 牛磺酸组：每天吸烟染毒前给大鼠灌胃牛磺酸600mg/kg，共75天。 材料与方法 阻塞性肺气肿模型制备方法 将大鼠放入80cm?60cm?58cm的有机玻璃制成的染毒箱内，在其右上角开通一个直径1cm的通气孔。大鼠每天吸烟2次，每次16支，时间30min，2次间隔4h，连续75天。 被动吸烟染毒方法：将点燃的香烟通过三通将烟雾吸入100ml的注射器中，关闭吸烟通路一端，再打开三通的另一端将烟雾注入染毒箱内进行大鼠被动吸烟染毒。。 大鼠肺功能测定（维A酸实验各组） 吸烟染毒结束后第2天，应用动物呼吸功能测定仪（北京悦宏达有限公司产品）测定大鼠的0.3秒用力呼气量（FEV0.3）、第0.3秒用力呼气量与用力肺活量比值（FEV0.3/FVC）、功能残气量（FRC）以及动态顺应性（Cld）。 材料与方法 形态定量分析（维A酸实验各组） 各组的每张病理切片随机选取上、中、下、左、右5个视野，用HIPS-1000多功能彩色病理图文分析系统对进行每视野的平均肺泡数、平均肺泡面积和平均肺泡直径的测定；对weigert弹力纤维染色标本进行弹性纤维相对含量测定；对免疫组化标本进行MMP-2和MMP-9蛋白相对含量测定。 大鼠平均肺动脉压测定（?-胡萝卜素与牛磺酸组） 按孙波等方法经右颈外静脉插入微导管，连接CY-682D型生理多导仪），测定mPAP。 大鼠血清、肺组织各项指标检测 MMP-2、MMP-9、IL-6和IL-8采用ELISA方法检测； 鸟苷酸含量采用放射免疫方法检测； NO、NOS、GSTs采用分光光度法进行检测； SOD活性采用邻苯三酚法，LPO采用硫代巴比妥酸法检测。 材料与方法 病理光镜标本制备及免疫组织化学染色 维A酸实验各组于吸烟染毒结束后次日取每只大鼠的右下叶肺组织，常规HE染色和weigert弹力纤维染色，部分行增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色，阳性反应为胞核呈棕褐色；取每只大鼠右中叶肺组织，制成冰冻切片，同上进行MMP-2和MMP-9的免疫组织化学染色，阳性反应为胞浆呈棕褐色。 ?-胡萝卜素与牛磺酸实验各组于吸烟染毒结束后次日，各组随机取大鼠5只相同部位肺组织（右肺中下叶），用10%甲醛固定，HE染色，观察各组肺组织病理变化情况。 统计学处理  采用SPSS8.0版统计软件进行F检验和直线相关与回归分析。实验数据以x±s表示，组间比较用t检验，多组间比较用方差分析（F检验和q检验）。 结 果 结 果 结 果 结 果 结 果 结 果 单纯吸烟组 HE×100 （慢性支气管炎） 结 果 结 果 结 果 结 果 维A酸实验各组 病理改变 光镜观察：模型组大鼠支气管粘膜上皮大片脱落，管壁及周围大量的单核细胞和淋巴细胞浸润；周围肺组织普遍存在肺泡型肺气肿，表现为肺泡结构紊乱、肺泡壁变薄或断裂、肺泡腔扩大，部分融合成肺大庖。用药组大鼠的支气管粘膜上皮脱落较模型组明显减轻，炎性细胞浸润以及肺泡壁断裂和肺泡腔扩大情况亦较单纯吸烟组减轻。形态学定量分析见表1。 呼吸功能测定 与对照组比较，模型组FEV0.3和FEV0.3/FVC明显下降，而FRC与Cld则显著增加（P0.01），应用RA后FEV0.3和FEV0.3/FVC明显升高，FRC显著降低（P0.05）；Cld也有下降，但差异无显著性（P0.05，表2）。 结 果 BALF中MMP-2和MMP-9的活性测定 模型组与对照组比较，用药组与模型组比较，差异均有显著性（P0.05，表3）。 支气管、肺组织中MMP-2、MMP-9以及PCNA的免疫组化结果 模型组与对照组大鼠比较，支气管、肺组织中MMP-2和MMP-9的相对含量显著增加。模型组与用药组比较含量明显减少（P0.01）。对照组极少有PCNA表达，模型组PCNA的表达增加，PCNA指数（每1000个细胞中的阳性细胞数）上升（P0.01）