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口 腔 病 理 科 免疫組織化學染色介紹 An Introduction of Immunocytochemistry 歡迎出席本課程 明白免疫染色的原理 瞭解免疫染色的種類 知道免疫染色的應用 Immuno histochemistry cytochemistry Antibody Antigen Antibody Antigen Detection System Antigen Antibody 釣魚作為比喻 Antibody 魚餌 魚 Antigen 浮標 Labelling System 釣竿 Method Method Fixation/Fresh Polyclonal - a mix of Ig (rabbit) Monoclonal - a single class of Ig (mouse) Synthetic\ Commercial Enzyme: Horseradish Peroxidase (HP), Alkaline Phosphatase (AP);FITC, TRITC (tetramethyl rhadamine isothiocyanate); gold; isotope Chromagen: Diamino benzidine (DAB) (Autolysis) 24 h Excessive Enzyme (trypsin) Microwave Autoclave 免疫染色的原理 Merits Simple Quick Cheap Drawback High background Lower intensity Direct Method Antigen Cytoplasm Antigen Endothelial cell Nucleus Labelling (Only one) Labelled Primary Antibody Human Rabbit/mouse anti-human 2. 免疫染色的種類 Higher intensity Merits Simple Quick Cheap Drawback High background Indirect Method Cytoplasm Antigen Antigen Endothelial cell Nucleus Unlabelled Primary Antibody First labelling Second labelling Human Rabbit anti-human Horse anti-rabbit Labelled Secondary Antibody PAP Method Antigen Cytoplasm Antigen Endothelial cell Nucleus Unlabelled Secondary (Bridging) Antibody Peroxidase Anti-Peroxidase (PAP) Unlabelled Primary Antibody First labelling Second labelling Third labelling Higher intensity Drawback Expensive Time consuming Human Rabbit anti-human Horse anti-rabbit Rabbit PAP ABC Method Antigen Cytoplasm Antigen Endothelial cell Nucleus Unlabelled Primary Antibody Higher intensity Drawback Expensive Human Rabbit anti-human Horse anti-rabbit Biotinylated Secondary (Bridging) Antibody Avidin- Biotinylated Peroxidase Complex (ABC) Cytoplasm Nucleus Antigen Antigen Endothelial cell Elimination of Endogenous Peroxidase Labelled Primary Antibody Endogenous peroxidase H2O2 H2O2 H2O2 H2O2 Eliminate endogeous peroxidase Labelling system: Peroxidase Drawback High backgrou

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