HPLC法同时测定复方龙脷胶囊中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量.docVIP

HPLC法同时测定复方龙脷胶囊中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚含量 　　摘要：建立复方龙脷胶囊中3种蒽醌类成分（大黄素、大黄酚和大黄素甲醚）的测定方法。 　　关键词：复方龙脷胶囊；HPLC；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚 　　中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4789-03 　　龙脷叶[1]是广西特有的壮族药用资源，在壮医临床上用于治疗肺热咳嗽、吐血、风火牙痛、风湿骨痛等症，广西龙脷叶资源丰富，极具开发潜力。壮药复方龙脷胶囊组方来源于壮药经验方，其由壮药龙脷叶（壮药名为蒙凛垄）、大黄等药味组成，具有清热润肺、疏肝除烦、养阴通便的功效，经多年临床使用，对精神病障碍引起的阴虚火旺、烦躁、便秘等症状有很好的疗效。复方龙脷胶囊中的大黄有清热凉血之功效，能迅速泻火通便排毒，又助君药滋阴养血，血盈津丰，火不自生。大黄泻下的有效成分为游离型蒽醌。为有效控制复方龙脷胶囊的质量，本研究参考相关文献[2-9]并在此基础上建立了复方龙脷胶囊中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚3种成分的含量测定方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器 　　高效液相色谱仪（1260 Series，美国Agilent公司），配备四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱；超声波清洗器（KQ3200B 型，昆山超声仪器有限公司）；台式高速离心机（LG16-WA，北京京立离心机有限公司）；超纯水系统（Millipore公司）；电子分析天平（CP224S，德国Sartorius公司）。 　　1.2 试剂 　　大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110756-200110），大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110796-200615），大黄素甲醚对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110758-201013）。复方龙脷胶囊（批号：120601-120606 ）由广西鸿博药业有限公司提供。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。 　　1.3 色谱条件 　　Waters Symmetry C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温25 ℃；流动相为甲醇-水（95∶5，V/V），流速1.0 mL/min；检测波长254 nm，进样量10 μL。此色谱条件下，大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰与其他组分分离良好。 　　1.4 溶液配制 　　1.4.1 对照品溶液 分别称取大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加甲醇制成每毫升含大黄素0.108 0 mg，大黄酚0.110 0 mg和大黄素甲醚0.063 4 mg的溶液，即得大黄素、大黄酚和大黄素甲醚储备液。 　　1.4.2 供试品溶液 称取复方龙脷胶囊内容物（批号120602）约0.7 g，置具塞三角瓶中，加入甲醇25 mL，超声处理20 min，放冷，补足减失重量。滤过后取滤液离心10 min，静置，用0.45 μm滤膜过滤，即得供试品溶液。 　　1.4.3 阴性样品溶液 按处方比例及工艺配制不含大黄的复方龙脷胶囊，按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。 　　2 结果与分析 　　2.1 系统适应性试验结果 　　分别吸取大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品溶液和供试品溶液及阴性样品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪，结果显示，大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的保留时间分别为5、7和9 min左右，阴性对照样品对测定无干扰，色谱图见图1，大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰与邻近峰达到基线分离，分离度良好。 　　2.2 方法学考察 　　2.2.2 精密度试验结果 精确吸取大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品溶液，重复进样6次，测得峰面积的RSD分别为0.09%、0.07%和0.06%，表明精密度良好。 　　2.2.3 稳定性试验结果 吸取供试品溶液按上述条件分别于 0、2、4、6、8、12 h进样测定，测得大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD为0.96%、0.88%和0.23%。结果表明，样品溶液在12 h内稳定。 　　2.2.4 重复性试验结果 取同一批号的龙脷胶囊样品（批号120602）6 份，分别制备供试品溶液，并依照上述方法进行测定，计算得大黄素、大黄酚和大黄素甲醚平均含量为 0.34 mg/粒、1.02 mg/粒和0.23 mg/粒，RSD分别为1.4%、1.2%和1.2%，说明该方法重复性较好。 　　2.2.5 加样回收率试验结果 取已知含量的样品（批号120602）6份，取约 0.35 g，分别加入一定量的上述大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品溶液。结果表明，大黄素平均加样回收率为100.30%，RSD为1.96%；大黄酚平均加样回收率为100.51%，RSD为1.15%大黄素甲醚平均加样回收率为101.26%