硫酸铜对蚕豆根尖细胞微核效应的研究.docVIP

硫酸铜对蚕豆根尖细胞微核效应的研究 硫酸铜对蚕豆根尖细胞微核效应的研究 前言：如今环境重金属污染已引起广泛关注。蚕豆根尖细胞在分裂期间对外界环境反应敏感, 造成染色体畸变、微核等分裂异常现象, 其变异率与污染物种类及浓度相关, 因此可利用蚕豆根尖分裂细胞的微核率测知污染物的环境毒理效应。蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。本实验利用蚕豆根尖微核技术, 研究了不同浓度的硫酸铜对蚕豆根尖细胞微核诱变的影响, 从而从细胞的水平上来研究重金属的毒害机理, 为进一步评价环境质量具有重要意义。 1 概述 如今环境重金属污染已引起广泛关注。植物对重金属的吸收、积累及重金属对植物的生理生化特性的影响已有较多报道, 而其对染色体行为的影响少见报道。蚕豆根尖细胞在分裂期间对外界环境反应敏感, 造成染色体畸变、微核等分裂异常现象, 其变异率与污染物种类及浓度相关, 因此可利用蚕豆根尖分裂细胞的微核率测知污染物的环境毒理效应。随着微核形成机制的阐明以及检测手段和实验技术的不断改进和完善, 蚕豆根尖微核试验在重金应用。本实验利用蚕豆根尖微核技术, 研究了不同浓度的重金属对蚕豆根尖细胞微核诱变的影响, 从而从细胞的水平上来研究重金属的毒害机理, 为进一步评价环境质量具有重要意义。 2 材料和方法 2.1实验材料 A．实验材料：蚕豆种子 B. 实验器材 [1] 光学显微镜 [2] 试管(10ml)×2 [3] 蚕豆发芽盒 [4] 其它：镊子、手术刀、载玻片、盖玻片、滤纸等。 C. 试剂 [1] 硫酸铜溶液：1g/L、5g/L、10g/L [2] 卡诺氏固定液：将乙醇和冰醋酸以3：1(V/V)混和配制； [3] 水解分离液：盐酸与95%酒精1：1混合； [4] 改良苯酚品红染液母液：将3.0g碱性品红溶解在100ml 70%乙醇中，以1:9的比例将其与5%苯酚溶液混和，即得到改良苯酚品红染液母液。 [5] 苯酚品红染液：将45ml母液，6ml冰醋酸，6ml 37%甲醛混合均匀。 [6] 改良苯酚品红染液：20ml苯酚品红染液加入180ml 45%乙酸和3.6g山梨醇，静置两周后使用。 2.2 实验方法 2.2.1 蚕豆种子的浸使根尖完全浸入处理水样中，浸 2.2.3 材料固定 借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如：蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。 ml试管中，用刀片或小剪刀切取经过处理的长约0.5-1.0cm的幼根，放入试管内，用试管塞盖紧，室温下固定20-24h，固定液的用量为材料体积的15倍以上。 2.2.4 水解分离 水解分离的作用是去除细胞内未固定的蛋白质, 同时使胞间层的果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。用镊子取固定好的蚕豆根尖，放在试管内，加水解分离液2ml，室温下处理8-20min，倒去水解分离液，再加入固定液2ml，软化5min，软化对细胞壁起腐蚀作用。然后倒去固定液，用蒸馏水反复冲洗使材料呈白色微透明，以镊子柄轻压能压碎为佳。 2.2.5 染色和压片 切取蚕豆根尖分生组织放在载玻片上纵横切成几段，放在载玻片上，以十字压片法覆以载玻片，用镊子柄或铅笔头轻敲几下，再用拇指用力下压使细胞充分分散，注意不要移动玻片，然后分开两玻片，各滴上1-2滴染液，染色20-30min后加上盖玻片，注意不要产生气泡，最后用吸水纸吸去多余染液。 2.2.6 镜检 在40×10倍镜显微镜下，凡小于主核1/4以下的，同主核有相同染色效果的，圆形、椭圆形或其他类似的形状的染色物质都可以算作微核。 3 结果与讨论 3.1 在显微镜下, 1g/LCuSO4溶液下可以观察到微核, 而5g/L和10g/L的CuSO4溶液下看不到微核。从观察到的微核可以判断出微核的着色与主核相当或略浅一些, 其形态为圆形, 椭圆形或不规则形, 大小在主核1 /3以下, 图： 3.2 CuSO4溶液下蚕豆根尖微核数的统计 CuSO4浓度（g/L） 0（对照组） 1 5 10 有无微核 无 有（少） 无 无 3.3 由实验结果可以看到，对照组没有出现微核，CuSO4溶液浓度在1g/L的时候，蚕豆根尖细胞产生微核，而在5g/L和10g/L硫酸铜溶液时没有微核出现，原因可能是：高浓度的重金属溶液处理蚕豆根尖导致微核率下降，但细胞受损伤的程度更为严重，使细胞周期不能正常运转，细胞不能得到更新，植物体生命活动受到更严重的影响。 3.4 查阅相关文献