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正交试验优选反枝苋总黄酮提取工艺 　　摘要：为优选反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）中总黄酮的最佳提取工艺，试验以芦丁为标准品计算反枝苋中总黄酮的含量，通过正交试验考察不同因素和水平对提取工艺的影响。结果表明，反枝苋中总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度50%，料液比1∶15，水溶回流法提取3次，每次提取1.5 h。该工艺合理、简单，适用于反枝苋总黄酮的提取，可为该资源的利用提供参考。 　　关键词：反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）；总黄酮；正交试验；提取工艺 　　中图分类号：TQ28 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4748-03 　　反枝苋是苋科一年生植物反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）的茎叶。现代医学证实，反枝苋含有丰富的铁、钙、胡萝卜素和维生素C，对青少年的生长发育和成人的身体健康都有帮助。反枝苋中没有草酸，所含的钙质很容易被人体吸收，而丰富的铁可以合成细胞中的血红蛋白，有造血和携带氧气的作用，被誉为“补血菜”。反枝苋中含有多种氨基酸，尤其是含有人体所必需的赖氨酸，而玉米、小麦、大米等谷物中含量则较少，因此常吃嫩反枝苋对人体健康是很有益的。 　　中医认为，反枝苋性凉，味甘，具有清热明目、通利二便、收敛消肿、解毒止痢、抗炎止血等功效，可治疗尿血、内痔出血、扁桃腺炎、急性肠炎等症。 　　黄酮类化合物是存在于自然界中的一大类化合物，在食品和医药工业上有着广泛的应用。本研究考察了乙醇浓度、提取时间、提取次数、料液比等因素对反枝苋中总黄酮提取率的影响，并以此4因素为指标设计正交试验，优选反枝苋中总黄酮最佳提取工艺条件，为反枝苋的进一步深入开发利用提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 药材与试剂 试验用反枝苋于2011年10月采自重庆医科大学药物园（经鉴定为苋科反枝苋），粉碎，过筛，低温密封干燥保存；芦丁标准品：批号153184-201006（购自北京世纪奥科生物技术有限公司）；95%乙醇、无水甲醇、丙酮等均为分析纯；蒸馏水为实验室自制。 　　1.1.2 仪器与设备 UV765CRT型紫外可见分光光度计（上海圣科仪器设备有限公司）；AL204型分析天平（万分之一）[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；HH-6型恒温数显水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；SB-3200DTD型超声波清洗机（上海茸研仪器设备有限公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标准曲线的绘制 精密称取芦丁对照品20.0 mg，以95%乙醇溶解，摇匀，定容至100 mL容量瓶中使之浓度为0.2 mg/mL。准确移取芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于25 mL容量瓶中，分别加水至6 mL，然后加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀放置6 min，再加入10%硝酸铝1 mL，摇匀放置6 min，最后加入4%氢氧化钠溶液10 mL，加95%乙醇定容至刻度，摇匀放置15 min。用紫外分光光度计在510 nm处测其吸光度（A），以吸光度（A）为纵坐标、芦丁溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，得到标准曲线方程为：y=1.893x+0.002 5，r=0.999 5。 　　1.2.2 提取方法对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，料液比为1∶15（m/V，g/mL，下同），提取时间1.5 h，考察不同的提取方法（水浴回流法、水煮法、超声波法）对反枝苋总黄酮提取率的影响。 　　1.2.3 提取时间对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，料液比为1∶15，水浴回流法提取3次，考察不同的提取时间（0.5、1.0、1.5、2.0 h）对反枝苋总黄酮提取率的影响。 　　1.2.4 提取溶剂对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，分别用50%、70%乙醇、无水甲醇及丙酮水浴回流法提取3次，料液比均为1∶15，提取时间1.5 h，考察不同提取溶剂对反枝苋总黄酮提取率的影响。 　　1.2.5 提取次数对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，料液比为1∶15，水浴回流法提取1.5 h，考察不同的提取次数（1、2、3、4次）对反枝苋总黄酮提取率的影响。 　　1.2.6 料液比对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，回流法提取2次，提取时间1.5 h，考察不同的料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20）对反枝苋总黄酮提取率的影响。 　　1.2.7 正交试验设计 根据反枝苋总黄酮提取率的影响因素[1-5]